莲房原花青素对老年sd大鼠记忆障碍的影响及其机制分析-effects of lotus seed procyanidins on memory disorders in elderly sd rats and its mechanism analysis.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文 中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□ ，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√” ）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日前言世界上大多数国家正迅速步入老龄化阶段，中国是世界上老年人口最多的国家之 一，估计到2020年中国的老年人口将达到2.48亿，2051年将会达到4.37亿。如何处理 好老年人的日常生活和卫生保健等问题已经是关系到国家经济发展和社会和谐的重 要问题。Crook 等[1]在 1982 年提出与年龄相关的记忆损害。据统计，全球有超过 2000 万的人患有老年性痴呆[2]。估计我国现有痴呆的老年患者超过 400 万，其中老年性痴呆 约占 1／3。因此，尽早干预对降低老年人痴呆发病率，提高老年人群生活质量尤为重 要。然而，究竟是什么原因导致认知功能障碍，目前其发病机制尚未完全清楚，认为 AD 是一个多因素多途径综合作用的结果。早在二十世纪七十年代发现胆碱能拮抗剂可损害小鼠的记忆[3－8]后，人们就意识 到脑组织胆碱能系统在学习和记忆中的重要性。药理学研究证实[9]：毒蕈碱受体拮抗 剂如东莨菪碱和阿托品可损害啮齿类动物记忆能力。一氧化氮（nitric oxide，NO）是一种细胞间信息交换的载体，广泛参与机体多种 生理功能的调节，它既具有神经保护作用又具有神经损害作用[11]。NO介导的神经病 理作用主要源于它和过氧化物之间的反应产物形成了具有强细胞毒性的氧化亚硝酸 盐[12]。研究表明，大量的NO却能够产生细胞毒性[13]。NO在记忆的形成中起逆向信使 作用，参与长时程增强（LTP）的形成[14,15]。原花青素是具有强抗氧化作用的生物类黄酮，一般为红棕色粉末、味涩、溶于水 和大多数有机溶剂[16]。结构单元间缩合键连接的位置不同而构成不同类型的寡聚物， A型主要是单体儿茶素的4位和8位以及2位和7位缩合形成二聚体；B型主要是单体儿 茶素的4位和8位缩合。莲房是原花青素的良好来源，已有研究表明原花青素可提高老 年大鼠的学习记忆能力[17，18，19]，该课题组将在本次实验中进一步探讨莲房原花青素 对年龄相关的记忆障碍的改善作用及其可能的机制。1.1 主要试剂和仪器1. 实验材料和方法莲房原花青素由华中农业大学提供 超氧化物歧化酶试剂盒南京建成生物工程研究所 谷胱甘肽试剂盒南京建成生物工程研究所 考马斯亮蓝试剂盒试剂盒南京建成生物工程研究所 硫酸链霉素美国Sigma公司盐酸胍美国Sigma公司一氧化氮合酶试剂盒南京建成生物工程研究所 毒扁豆碱美国Sigma公司盐酸羟胺美国Sigma公司乙酰胆碱标准品美国Sigma公司Morris 水迷宫Columbus 公司 Videomex-v 型低温高速离心机德国Eppendorf公司Spectra Max M2 全能酶标仪美国Molecular Devices公司1.2 实验动物1.2.1 动物来源：老年 SD 大鼠 200 只，15 月龄，体重 300－400g；青年 SD 大鼠 40只，3 月龄，体重 200－300g；由 Sino-British Sippr/BK 提供。1.2.2 动物筛选：从 200 只 18 月龄老年老鼠中排除疾病以及体重不合格者，剩余 150 只健康大鼠采用 Morris 水迷宫筛选老年记忆障碍大鼠和老年记忆正常大鼠。以青年大 鼠隐蔽平台逃避潜伏期平均值(Mean)与标准差(SD)为标准，将隐蔽平台逃避潜伏期大 于 Mean+3SD 的定为老年学习记忆减退大鼠;小于 Mean-0.5SD 的定为老年学习记忆正 常大鼠[20]。1.2.3 动物分组及给药：①青年对照组（young）：从40只4月龄青年大鼠中选择水迷宫潜伏期成绩处于中间水 平的20只进入试验；蒸馏水灌胃7周，每天一次。②老年记忆正常组AU (aged unimpaired)：与青年组潜伏期平均值相比小于0.5个标准差的个体（0.5 SD, compared with the young control），26只；蒸馏水灌胃7周，每天一 次。