keap1nrf2信号通路在铜绿假单胞菌脂多糖上调气道粘蛋白muc5ac表达中的作用-the role of kea p1 nrf 2 signal pathway in upregulating the expression of airway mucin mu c5 ac by pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide.docxVIP

u···E11唰蛐唰MAUMM州，。恻幻唰川州 民d州川川00川川川附加AE，州州Y.蝴...浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所最交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:你也负签字日期:沪f 年〉月冲日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权保留并向国家有关部门成机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将 学位论文的全部戚部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名:杯吃吗导师签名:签字日期 : .Y )\( 年〉月1f日签字日期:)4年ν 月w日乙，TJ ，aE伪- f 、，J浙江大学硕士学位论文 致蹦致谢首先，衷心感谢我的导师沈华浩教授 2 年多来的悉心教诲.导师敏捷的思维、 渊博的知识、严谨的治学风范以及对事业、理想的执着追求，是我今后学习的榜 样.沈老师高尚的人格魅力和学术素养，将使我受益终生!衷心感谢李雯老师在整个实验过程中给予的精心指导和无私帮助! 感谢陈志华副研究员以及刘进主任、徐志豪主任等呼吸科各位老师对我的指导和帮助.感谢浙医二院临床试验中心各位老师给予的热情指导。 感谢颜伏归、张根生、黄华琼、陈娟、华雯、邱章伟、许兵、李娜、刘慧、周宏斌、刁然、张敏、陈江萍、周晓曦、刘磊等兄弟姐妹在实验过程中给予精力 上的付出和情感上的支持。特别感谢我的实验伙伴应英华，在她的通力合作下才 能顺利完成本实验。最后，我要感谢我的家人在我漫长求学生涯中给我的支持、关心和鼓励!给 予我前进的勇气!再次感谢所有关心过我、帮助过我的老师、同学和工作人员们! 本课题受到国家自然科学基金项目 (No.)的资助，特此致谢!Keapl/Nrf2信号通路在铜绿假单胞菌脂多糖上调气道粘蛋白 MUC5AC 表达中的作用浙江大学医学院硕士研究生导师l临床医学林晓萍 沈华浩教授」矗锢 Ef1J JνHVF中文摘要正常情况下气管、文气管上皮细胞和粘膜下腺分秘的粘液是机体固有免疫的 重要组成部分，它对入侵气道的各种异物、病原体具有屏障、清除作用.但在病 理情况下，过度分泌的粘液是哮喘、慢性阻寡性肺疾病(Chronic obstructive 阴阳onary diseases ， COPD)、支气管扩张、囊性纤维化 (Cystic fibrosis ，CF) 等 慢性气道疾病发病、死亡的常见原因，目前仍缺乏有效的治疗手段。阐明气道粘 液合成的调控机制，将为气道粘液商分泌提供新的治疗靶点，对开发有效抑制气 道粘液高分泌的新药物具有重要意义.粘蛋白 MUC5AC 是气道粘液的主要成分，所以研究其表达的调控机制尤为建立 旦多种细菌均可诱导气道粘蛋白阳 C5AC 表达上调，包括致呼吸道感染的常见 细菌 m 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa ，PA) 及其胞壁成分脂多糖 (Lipopolysaccharide ，LPS)，但目前PA-LPS 上调气道粘昼白 MUC5AC 表达的分 子机制尚未完全阐明.最近有研究发现活性氧( Reactive oxygen species ，ROS) 可通过 TACE→TGF-α→ EGFR 信号通路介导香烟烟雾、中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil el础阳se，NE)上调气道上皮细胞粘蛋白 MUC5AC 的表达;本实验絮既 往研究发现可能存在丁 LR4-PKC 呻 Duoxl 信号通路调控 PA也PS 诱导的气递上皮 细胞 ROS 合成，进而通过 ROS 及其下游的倍号通路丁:A CE-TGF-α 叩 EGFR 调控 粘蛋白阳C5AC 的表达。以上研究提示氧化应激在 PA-LPS 诱导气道 MUC5AC日:.;1111高表达中具有重要作用.核因子相关因子 2 (NF四嗣related facωr2 ，Nrf2)是细胞抗氧化应激反应的调 节中枢，其活性主要由 Ke叩1 (Keleh-like ECH峭associated protein 1)负性调节. 生理状态下， Nrf2与 Keapl 相精联，后者与胞浆肌动蛋白结合而被锚定在胞浆， 通过泛素介导的蛋白降解系统维持 Nr恒的基础水平;而在氧化应激作用下， Nrf2 与 Keapl 解精联、转移入核，与其专性伴侣 m小 Maf 蛋白结合成异二聚体，识别 并结合抗氧化反应元件(