kiss1mrna在雌性性早熟大鼠下丘脑中的表达及意义-expression and significance of kiss 1 mrna in hypothalamus of female precocious puberty rats.docxVIP

Kiss-1mRNA在雌性性早熟大鼠下丘脑中的表达及意义华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科研究生：刘小辉导师：林汉华教授摘要目的通过检测Kiss-1mRNA在雌性性早熟大鼠不同时期（青春期早期﹑青春期中期及正常青春前期﹑正常青春期早期）下丘脑中的表达，探讨Kiss－1在中枢性性早熟发生发展中的作用。方法1、建立动物模型：正常5日龄清洁级Sprague-Dawley雌性大鼠40只，随机分为4组，对照1组，对照2组，模型1组，模型2组，每组10只。模型1组、模型2组大鼠于5日龄每只皮下注射300μg达那唑以诱导中枢性性早熟。对照1组、对照2组大鼠每只皮下注射等体积的生理盐水。出生后25天开始每天检查阴道开口情况，如动物在第一次检查时阴门已经开口，则阴门开口时间记为25天，直至大鼠建立正常的性周期。2、模型1组大鼠在阴道口开放后第一个发情间期被处死，对照1组与其1:1比例同时处死，对照2组大鼠是在进入青春期后(第一个发情间期)处死，模型2组在第二个发情间期处死；处死前大鼠称重，处死后留取子宫和卵巢标本并称重，计算子宫指数和卵巢指数；同时切取下丘脑组织100mg，冷藏备用；。3、化学发光法检测大鼠不同时期血清LH的浓度。5、采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测对照1组，对照2组，模型1组，模型2组下丘脑的Kiss-1和GnRHmRNA的表达。结果1、模型1组，模型2组大鼠阴道口开放时间和第一个发情间期时间较对照1组提前（P0.05），提示模型组大鼠青春期启动提前发生；模型1组，模型2组（D1）的LH水平及GnRHmRNA的水平与对照1组比较有显著差异（P0.05），但与对照2组比较无显著性；以上结果表明中枢性性早熟模型建立成功。2、模型1组大鼠血清LH、GnRHmRNA水平及卵巢、子宫的重量与对照2组比较差异均无显著性，但均大于对照1组（P0.05），模型2组大鼠血清LH（D2）均大于模型1组，差异有显著性（P0.05），结果提示LH及GnRHmRNA在青春前期组﹑性早熟青春期早期组﹑性早熟青春期中期组的水平逐渐增高。3、与对照1组（正常青春前期）相比，模型1组（性早熟青春期早期）和模型2组（性早熟青春期中期）的Kiss-1mRNA的水平分别增加1.39和2.77倍，差异具有显著性意义（P0.05），对照2组（正常青春期早期）与模型1组（性早熟青春期早期）的Kiss-1mRNA的表达无统计学意义（P0.05）。结论Kiss-1mRNA的表达与生长发育的时期密切相关，提示Kiss-1可能与中枢性性早熟的发生有关。关键词Kiss-1；中枢性性早熟；基因表达；RT-PCR；大鼠GeneExpressionofKiss-1inhypothalamusofcentralprecociousfemaleratsCandiate:LIUXiaohuiSupervisors:Prof.LINHanhuaAbstractObjectiveToinvestigatethegeneexpressionofKiss-1inthehypothalamusofcentralprecociousfemaleratsatvariousstagesofdevelopment.MethodsForty5-day-oldnormalfemaleSprague-Dawleyratswererandomlyassignedintofourgroupsof10rats:Controlgroup1,Controlgroup2,Modelgroup1andModelgroup2.Theratsfromthetwomodelgroupswereinjectedwith300ugofdanazolat5daysofagetoinducecentralprecociouspuberty.Thetwocontrolgroupswereinjectedwithnormalsalineinstead.Ratswereusedtoobservethedayofvaginalopeningandthedaysetupregularestrouscycleonday25.ForthedeterminationofKiss-1mRNAexpressioninthehypothalamus,theratsoftheModelgroup1weresacrificedduringthefirstdiestrus(earlypuberty)andmeanwhiletheratsoftheControlgroup1weresacrificedwhentheywereatprepuberty;theControlgroup2ratsweresacrificedatthefirstdiestrus(ea