二氧化硅载体的成型及在pvdfsio2复合球上的脂肪酶固定化研究-study on the formation of silica carrier and lipase immobilization on pvdf sio _ 2 composite spheres.docxVIP

摘要脂肪酶（EC 3.1.1.3 ,甘油酯水解酶）作为一种生物催化剂，广泛地应用于纺织、食品、 医药、精细化工等领域。游离酶容易丧失生物活性，且不易回收利用。脂肪酶固定化可以 提高酶的稳定性、降低能耗、绿色环保、实现回收利用和连续化生产，工业应用时多采用 将其固定化的方法。因此，酶的固定化是酶催化技术工业化过程中的重要内容。载体性质会对酶负载量、酶活及酶流失率影响显著。目前，用于固定化酶的载体很多， 其中二氧化硅具有成本低、耐酸碱、寿命长、对微生物无毒性、不易被微生物分解等特性， 而且其具有较大的比表面积，蛋白吸附量较大，因而是一类重要的载体材料。但是，二氧 化硅载体的缺点在于容易团聚、难于成型加工，不宜填充在大型反应器中应用于工业生产。 所以载体的成型成为解决这一问题的关键。本论文的主要工作和取得的主要成果如下：1. 以柱状假丝酵母脂肪酶为研究对象，选取了亲疏水性不同的二氧化硅颗粒作为固 定化载体，用吸附法制备了固定化脂肪酶，探究了不同亲疏水性载体对脂肪酶固定化的影 响。研究结果表明，载体接触角在 90-100°左右时，对 CRL 吸附量最大，更亲水或更疏水 的载体的吸附量都有所下降，接触角为 94°的疏水二氧化硅载体吸附量最大，最高可达 160 mg/g，筛选出优良的载体。2. 实验中制备了包裹二氧化硅（SiO2）的聚偏氟乙烯（PVDF）-二氧化硅（SiO2）的 复合球用作载体，固定化假丝酵母脂肪酶 (CRL)。研究结果表明，纯 PVDF 球、PVDF-SiO2 复合球用作酶固定化载体，对 CRL 的吸附量都比较大。PVDF-SiO2 复合球中，随着 SiO2 含量增多，酶的吸附量和活力回收率都有所提高。PVDF 与 SiO2 质量比为 1:1 的复合球有 最高的酶活力回收率，可达 50.98 %，该复合球是实验中最优的固定化载体。固定化 CRL 后，PVDF-SiO2 复合球比 SiO2 更容易实现固液分离，并且对底物溶液无污染。关键词：二氧化硅，聚偏氟乙烯，脂肪酶，固定化，无机有机复合材料。AbstractAs a biological catalyst, lipase (EC 3.1.1.3, triacylglycerol ester hydrolases) enables their various applications: textile industry, food industry, pharmaceutical industry and fine chemistry. Lipase leads to the loss of the biological activity, and not easy to recycle. Immobilization of enzyme has been a significant strategy for most industrial applications due to advantages of product purification, continuous production, and biocatalyst recycling. What’s more, immobilization also improves enzyme stability while reduces energy consumption. So the key technique in the industrialization process of lipase catalysis is immobilization.The carrier is one of main factors in the technique of immobilization. Both the chemical property and microscopic structure of carriers play an important role in the lipase loading, enzyme activity and activity recovery. So far, amount of carriers with different structures has been developed. Among these carriers, silica materials as supports have been explored extensively due to the ease in stable structure, environmental acceptability, and more resistant to microbial attacks. Ho