食品中有害有毒物质的测定毒素.pptVIP

一、抗生素残留量的测定 ——四环素族 1.原理 将肉样经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，反相色谱分离，紫外检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素，四环素，金毒素 2.试剂 试剂名称 浓度 体积 土霉素 1.0mg/ml 1ml 四环素的盐酸溶液 0.01mol/l 1ml 金霉素水溶液 1.0mg/ml 2ml 第1页/共10页 将上述试剂置于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，配置混合标准溶液，此时每毫升含土霉素 、四环素个0.1mg，金霉素0.2mg。临用是现配。 3.操作步骤 (1).样品制取：称取5.00g（正负0.01g）切碎的肉样（5mm） 50ml锥形瓶中 加入5%高氯酸25.0ml 振荡器上振荡提取10min 离心管中 以2000r/min离心3min 取上清也经0.45um滤膜过滤 备用。 第2页/共10页 (2).色谱条件： ?检测器：紫外检测器，波长355nm，灵敏 度0.002AUFS ?色谱柱：6.2mm×15cm ?流动相：乙腈-0.01mol/l磷酸二氢钠溶液（30%硝酸溶液调节PH至2.5；35+65体积比） ?温度：柱温为室温 ?流速：1.0ml/min,进样量为10ul 第3页/共10页 (3)工作曲线的绘制 分别取7份切碎的肉样，每份5.00g(正负0.01g)，分别加入混合标准溶液0ul、0.25ul、50ul、100ul、150ul、20ul、250ul置于50ml锥形瓶中，加入5%高氯酸25.0ml,于振荡器上振荡提取10min,移入离心管中，以2000r/min离心30min,取上清液经0.45um滤膜过滤，取10ul滤液进样，以高峰为纵坐标，以抗生素含量为横坐标，绘制标准曲线。 4.计算 抗生素含量=A×1000/(m×1000）（mg/kg) A—样品溶液测的抗生素质量，mg m—样品质量，g 第4页/共10页 二、己烯雌酚留量的测定 1.原理 样品匀浆后经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，经紫外检测器在波长230nm处测吸光度，同条件下绘制工作曲线，乙烯雌酚含量与吸光度在一定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比较定量。 2.仪器和试剂 （1）仪器：高效液相色谱仪（具紫外检测器）、小型绞肉机、小型粉碎机、电动振荡机、离心机。 （2）试剂：使用的试剂一般为分析纯，有机溶剂需过0.5um滤膜，无机试剂需过0.45um滤膜。 第5页/共10页  ?甲醇、0.043mol/l磷酸二氢钠,磷酸。 ?乙烯雌酚标准储备液。精密称取100mg己烯雌酚溶于甲醇，移入100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES1.0mg.储于冰箱中。 ?己烯雌酚标准使用液。吸取10.00mlDES储备液，移入100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES100ug。 3.操作步骤 （1）提取及净化：称取5g(正负0.1g)绞碎（小于5mm)肉样品，放入50ml具塞离心管中，加10.00ml甲醇，充分搅拌，振荡20min，于3000r/min离心10min,将上清液移除，残渣中再加10.00ml甲醇，混匀后振荡20min,于3000r/min离心10min，合并上清液，此时出现浑浊，混匀，没毫升含DES100ug。 第6页/共10页 （2）色谱条件 ?紫外检测器检测波长230nm ?灵敏度：0.04AUFS ?流动相：甲醇-0.043mol/l磷酸二氢钠（70/30，用磷酸调PH=5，其中二水磷酸二氢钠水溶液需过0.45um滤膜。 ?流速：1ml/min ?进样量：20ul ?色谱柱6.2mm×150mm不锈钢柱 ?柱温：室温 第7页/共10页 （3）标准曲线的绘制 称取5份（每份5.0g)绞碎的肉样品，放入50ml具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准溶液（6.0ug/ml、12.0ug/ml、18.0ug/ml、24.0ug/ml）各1.0ml，同时做空白。其中甲醇总量为20.00ml，使其测定浓度为0.00ug/ml、0.30ug/ml、0.60ug/ml、0.90ug/ml、1.2ug/ml，混匀后振荡20min,于3000r/min离心10min,合并上清液，此时出现浑浊，需再离心10min,取上清液过0.5um滤膜，备