仪器分析课件第三篇 章3-化学发光-2014-3-30.pptVIP

邻菲罗林 (1,10-phenanthroline) 氧化剂: H2O2 催化剂: Cu2+ Co2+ Pb2+ Fe3+ Ni2+ 抑制剂: 蛋白质与Cu2+形成络合物 萤火虫发光 (firefly BL) ?max = 562 nm 此反应重要的分析对象是ATP 10-11~10-14mol 细菌发光 (bacterial BL) 还原型吡啶核苷酸黄素 主要分析物 FMN 10-12mol 此反应常用于NADH和NADPH试验 10-15mol ?max = 490nm 无机物的化学发光 一些无机物能够产生很弱的化学发光，例如： 硫酸氢盐被铬酸氧化 水被K、Na、Mg、汞齐分解 Al被空气中氧氧化 强酸被强碱中和 亚硫酸钠被空气氧化 一、 化学发光的应用 无机化合物化学发光分析 金属离子分析 (选择性差) 其它无机化合物的分析 有机化合物的化学发光分析 有机酸 (同系物必须借助于HPLC) 有机碱　 氨基酸 糖类 药物 3-13 化学发光的应用及仪器设备 化学化光在生物领域的应用 Fe 2+ 血浆和血清的化学发光 血浆脂蛋白的化学发光 尿液的化学发光 物质抗氧化活性的测定 H2O2 激发的化学发光 血浆和血清的化学发光 红细胞的化学发光 例子: luminol反应的应用 （1）该发光反应速度慢，某些金属离子可催化反应；利用这一现象可间接测定这些金属离子。可测痕量的Cu2+ 、Mn2+、Co2+、V4+、Fe2+、 Fe3+、 Ni2+、Ag+、Au3+、Hg2+等 （2）可检测低至 10-9 mol/L 的H2O2； （3）间接测定某些生物试样 氨基酸 + O2 ????? 酮酸 +NH3 + H2O2 氨基酸氧化酶 葡萄糖 + O2 + H2O ????? 葡萄糖酸 + H2O2 通过测定生成的H2O2 ，确定氨基酸、葡萄糖含量。 葡萄糖氧化酶 鲁米诺化学发光体系用于微量金属离子的测定 金属离子 氧化剂-添加剂 检出限（mol·dm－3） 灵敏度（μg·cm-3） Co(Ⅱ)Cu(Ⅱ)Ni(Ⅱ)Cr(Ⅲ)Fe(Ⅱ)Fe(Ⅲ)Mn(Ⅱ)Hg(Ⅱ) Ag(Ⅰ) Au(Ⅲ)Os(Ⅵ)或(Ⅷ)Os(Ⅳ)Ru(Ⅲ)或(Ⅳ)Ru(Ⅵ)Rh(Ⅲ)V(Ⅳ)V(Ⅴ)Ir(Ⅳ)Ce(Ⅳ)Th(Ⅳ)Ti(Ⅳ)Hf(Ⅳ) H2O2 H2O2 H2O2 H2O2 O2 H2O2－amineH2O2－amine H2O2 H2O2－Cu2＋－CN－ H2O2－α,α/－联吡啶 H2O2－Cu2+－CN H2O2 H2O2 H2O2 H2O2或KIO4H2O2或KIO4KIO4－HClO2－P2O74－ H2O2－Co配合物 KIO4 H2O2Cu2＋ H2O2Cu2＋ H2O2Cu2＋ H2O2Cu2＋ 10－10 10－9 10－8 10－9～10－10 10－10 10－8  　 　 　 　 　 0.0002 0.2 0.002a 0.01 0.001a 0.01 0.0002 0.002 0.0004 0.001 0.04 0.002 0.04 0.04 0.1a 1.0a 0.02a 0.01a 草酸二酯(能量提供体)+高浓度双氧水+稠环芳烃(能量接受体)+金属离子+溶剂组成的反应体系，可发出很强的可见光，发光效率高，使用不同的稠环芳烃，发射出不同颜色的光(冷光源)。 没食子酸、光泽精可测定的部分金属离子及检出限 金属离子 检出限/μg·g-1(没食子酸) 检出限/μg·g-1 （光泽精） Co(Ⅱ)Mn(Ⅱ)Ag(Ⅰ)Cd(Ⅱ)Pb(Ⅱ)Cr(Ⅲ)Cu(Ⅱ)Fe(Ⅱ) 4×10-4 0.4 0.5 0.8 1.0 5 6 6 6×10-4 2.0 0.3 0.2 1.0 3.0 6×10-3 某些物质生物发光分析的检测水平 化 合 物 检测水平/pmol NADH NADPH 6-磷酸－葡萄糖 乙醇 睾酮 雄酮 乳酸脱氢酶 葡萄糖―6―磷酸脱氢酶 乙醇脱氢酶 已糖激酶 氨甲蝶呤 三硝基甲苯 0.5～10000.5～10002～1000.003～0.012)×10-20.8～10000.8～10000.001～10.001～10.001～100.001～10.5～2 10 amol (a=10-18) 二、 特点 1.灵敏度极高