pi3kakt信号通路在食管鳞癌上皮间质转化中的作用-role of pi 3 kakt signaling pathway in epithelial-mesenchymal transition of esophageal squamous cell carcinoma.docxVIP

lioijlj出111原创性声明本人郑童声明:所盟交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任剧本人承担。学位论文作者:日期:年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅:本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文戚与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者1日期:年月日「摘要食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其浸润转移是患者预后莞、死亡事高的关键原因。恶性肿瘤的浸润转移过程是一个多基因多信号通路参与调节的复杂的分子过程，上皮间质转化(epithelial-mesenchymal衍肌sition，EMT)被认为是肿瘤发生浸润转移的重要的和必要的起始步骤。在EMT过程中，上皮细胞失去极性，细胞丢失巳cadherinzo斗(紧密连接蛋白)等上皮性标志，获得vimentin(波形蛋白)、fibronectin(纤维迎接蛋白)等问质性标志，同时细胞的侵袭能力和运动能力增强。Akt，也被称为蛋白激酶8，是一种进化上十分保守的丝/苏氨酸蛋白激酶，在PI3K1Akt倍号传导通路中起关键作用。哺乳动物细胞中的Akt有三种亚型，Aktl、Akt2和Atk30在生长因子等细胞外生长信号的剌激下，细胞表面的受体酶氨酸激酶激活并活化PI3K产生PIP3(磷脂酌-3-磷酸肌醇)，进而使Akt发生磷酸化活化，调节细胞的增殖、分化及蛋白合成，并参与血管形成，肿瘤的浸润，和转移等过程。除了影响细胞的增娟和凋亡，Akt还能够通过磷酸化糖原合成酶-3(GSK-3?)来上调Snail钮-cadherin的转录抑制子)的表达，促使EMT的发生。在胃癌、乳腺癌、卵巢癌、腆腺癌等恶性肿瘤中都存在着Akt的异常高表达，但有关食管鳞癌组织中地t的表达与食管鳞癌巳MT的关系，国内外的报道较少。转化生长因子币(transforminggrowthfactor币，TGF-?)是一种多效能的细胞因子，参与调节细胞的增娟、分化、凋亡等一系列细胞进程。除此以外，TGF书可以诱导多种细胞发生EM丁，是目前己知的EMT的主要诱导子，它不仅能够诱导生长发育和创伤愈合中生理性EMT的发生，还能够诱导纤维化和肿瘤进程中病理性EMT的发生。为探讨食管鳞癌中PI3K1Akt信号通路与EMT的关系，本研究采用免疫组织化学法检测了食管鳞癌组织及正常食管粘膜中Akt、p-Akt和E-cadherin蛋白的表达情况;以食管鳞癌细胞EC9706为研究对象，采用RNA干扰技术特异性地阻抑Akt的表达，并以外源性的TGF-?l剌激，探讨RNA干扰、TGF-?l剌激以及剌激与干扰联合作用对此t表达的影响，观察食管鳞癌细胞EC9706中E幽cadherin和vimentin表达的改变，以及对细胞侵袭能力的影响，并观察细胞形存的变化。材料和方法1.采用免疫组织化学SP法检测80例食管鳞癌组织及80例正常食管粘膜组织中A挝、p-Akt和E-cadherin蛋白的表达:2.AktsiRNA转染食管鳞癌细胞巴C97062.1倒置显微镜下观殡Akt基因沉默后细胞的形态学变化:2.2RT-PCR、Westem-blot法分别检测转染Oh(转染前)、24h、48h、72h后细胞中A挝、巴cadherinvimentin的mRNA及蛋白的表达12.3MTT法检测细胞增殖能力的变化:2.4Boydenchamb町侵袭小宽实验检测细胞侵袭力的变化。3.以外源性TGF币1作用于食管鳞癌细胞EC9706置显微镜下观察TGF-?l或TGF书1与AktsiRNA联合作用下细胞的形态学变化:RT-PCR、West町n-blot法分别检测在丁GF-?l及TGF币1与AktsiRNA联合作用下Akt、巴cadh创n、vimentin的mRNA及蛋白的表达:Boydenchamber侵袭小室实验检测在TGF-?l及TGF币1与AktsiRNA联合作用下细胞侵袭力的改变:4.统计学处理:采用统计软件SPSSI0.0进行统计学处理。计数资料计算阳性率，阳性事之间的比较采用矿检验(C协square)，相关性分析采用Spearman相关分析法进行分析:计最资料用文土S表示，两组均数的比较用t检验。-test)，两组以上均数的比较用方差