新型calt;#39;2+gt;荧光探针stdbt胞质、胞核calt;#39;2+gt;同时测定研讨.pdfVIP

李华静 摘要ca2+作为细胞内的第二信使，具有重要的生物学功能。而ca2+的信使功能 是通过细胞内游离Ca2+浓度及其分布的时空依赖性变化来实现的，ca2+信号的产生 和终止是细胞内ca2+增减、波动的结果。因此亚细胞水平Ca“含量及其分布变化的 动态监测对于ca2+信号传递本质的认识至关重要。其中，细胞核ca“在细胞有丝分 裂、细胞凋亡、基因转录、DNA转录与修复等活动中发挥着重要的调节作用，因 此细胞核Ca“的研究对阐明疾病的发病机理及防治具有重要的意义。目前，细胞内 游离ca2+的研究主要是用荧光探针标记，然后通过荧光显微成像分析来实现的，在 此探针的性能至关重要，探针若不能区分标记特定亚细胞区域，荧光显微镜也就 根本无法得到有关区域的ca2+信息。但迄今为止，还没有可区分性的同时标记胞核 和胞质区域的Ca“探针，而常采用将一种探针改性后导入胞核和胞质，这需要对改 性后的探针进行校准，而校准又受到细胞环境的影响，故常无法得到准确的结果， 导致得出相互矛盾的结论，尤其是胞核Ca2+和胞质ca“的调节机制研究，尚存在争 议。为此，本论文采用我们实验室自行合成的核、质双标的新型ca2+荧光探针 STDBT同时标记胞核和胞质，进行了不同激动剂刺激后胞核Ca2+和胞质ca“的同时 测定，探讨了其调节机制，为细胞胞质、胞核ca“信号转导机制研究提供了有意义 的参考。 本论文的研究主要开展了以下几个方面：1．采用激光共聚焦显微术，应用核、 负载大鼠心肌细胞，结合激光共聚焦显微镜，研究了大鼠心肌细胞胞核【ca2+】。和胞 激光共聚焦显微镜，在亚细胞水平探讨1GF．1诱导胞质【Ca“]。和胞核『Ca“】。升高的 机制。 本研究论文主要包括以下两个部分： 一．概述 论文对目前报道过的亚细胞区域(如：内质网、线粒体、胞核等)Ca2+的测定 方法进展和测定研究进展进行了较为详尽的综述。 二：．新型Ca2+荧光探针STDBT胞质、胞核钙同时测定研究 1．5-HT诱导大鼠心肌细胞胞核[Ca“1。和胞质[Ca2+1。的动员机制研究 显微镜研究了5．HT诱导大鼠心肌细胞胞核【Ca“】。和胞质【Ca2+】。的动员调节机制。 钙通道使外ca2+内流。而在胞核中除核被膜紧邻外周的肌浆网内ca2+释放外，还 可能有核被膜空腔上IP3介导的核ca2+库ca“直接释放进入胞核的参与。 2．大鼠心肌细胞胞核[Ca2+】。和胞质[Ca2+】。的调节机理研究 亚细胞水平探讨大鼠心肌细胞受不同激动剂刺激后胞核[ca“】。和胞质【ca“】。的变 化。表明在心肌细胞中胞核【ca“】n N胞N[Ca“】。在行使其信使作用时具有相对独 立性，激动剂诱导胞质【ca2+】。升高主要来源于外Ca“内流和内Ca“释放，而胞核 是核ca2+库的核被膜空腔的内Ca2+释放。 3．IGF-1诱导大鼠心肌细胞胞核[Ca2+】。和胞质[Ca2+】。升高的机制研究 膜空腔的内ca“释放。 5-HT1GF一1心肌细胞 关键词：钙荧光探针STDBT 胞核【Ca2+】。 胞质【ca2+]。 andmeasurementofnuclearCa2+and Ca2+ Simultaneous cytosolic study calciumfluorescent STDBT withnew Ca2+probe Li Huajing asanintracellular and a AbstractCalciumacts second messengerplaysvery rolein concentrationand impor