IL-10MMP-9在非小细胞肺癌中表达及预后相关性.docVIP

IL-10MMP-9在非小细胞肺癌中表达及预后相关性 　　[摘要] 目的 研究IL-10及MMP-9在非小细胞肺癌中的表达,探讨其与NSCLC的浸润、转移和预后的关系。方法 采用免疫组织化学法检测60例非小细胞肺癌及20例肺良性病变组织中IL-10及MMP-9的表达水平;运用单因素(log-rank)生存分析比较IL-10及MMP-9与各临床特征及预后之间的关系。结果 IL-10及MMP-9在NSCLC中的阳性表达率显著高于肺良性病变组织(P 　　[关键词] 非小细胞肺癌;IL-10;MMP-9;免疫组织化学;预后 　　[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2009)28-01-04 　　 　　肿瘤流行病学调查研究显示,在美国肿瘤已成为死亡的首位原因,发展中国家,肺癌的发生率一直呈上升趋势[1]。非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌患者的80%～85%,其5年生存率仅15%左右[2],而细胞免疫发挥着抗肿瘤的主导作用。故探讨NSCLC细胞免疫功能状态,可能对预测NSCLC患者预后具有重要意义。现应用免疫组化,研究IL-10、MMP-9在NSCLC中的表达情况及其与预后的关系,探讨其与肺癌浸润、转移的关系及预后意义。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1一般资料 　　选取南京市胸科医院胸外科自1995年以来,所有确诊和疑似NSCLC的手术病例60例和20例肺良性病变组织,术前均未做放疗或化疗,术中均行7～8组以上淋巴结清扫,所有标本送病理科检查,术后进行系统后续治疗,其中,男性41例,女性19例,年龄37～83岁,中位年龄65岁。所有病例均经病理证实,肺癌组织学分类按世界卫生组织(WHO)2004年肺癌分类标准,其中鳞癌32例,腺癌22例,6例为其他类型(大细胞癌、鳞腺癌、类癌)。根据1997年UICC的肺癌TNM分期标准分为I期16例,II期40例,III期4例,伴有淋巴结转移者44例,无淋巴结转移者16例。 　　 　　1.2免疫组化实验检测IL-10及MMP-9的表达 　　全部标本均经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,常规HE染色。免疫组织化学选用SP法测定,鼠抗人IL-10单克隆抗体、鼠抗人MMP-9单克隆抗体购自美国Biosource公司,光谱超敏SP试剂盒及DAB显色液等为美国Sigma公司产品。上述标本经HE染色和IL-10、MMP-9染色,参照试剂说明书进行免疫组化SP法检测。 　　 　　1.3结果判断 　　以PBS代替一抗设定为阴性空白对照,同时用已知阳性标本作为阳性对照。IL-10和MMP-9以细胞浆中有黄色颗粒为阳性细胞。蛋白累积的评分方法:参照Fromwitz综合计分法并略加修改行半定量分析,在400倍光镜下随机选择5个高倍视野,每个视野计数100个细胞,计算阳性细胞百分率。5%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～75%为3分、75%为4分。着色强度呈浅棕色为1分、棕色为2分、深棕色为3分。综合评分,4分为强阳性。双盲法读片[3]。 　　 　　1.4统计学分析 　　采用SPSS17.0统计软件包对数据进行分析,两组间比较采用χ2检验,各因素对生存的影响采用Log-Rank 检验,生存期按Kaplan-meier方法制作累计生存曲线,影响因素的多因素分析采用COX比例风险模型。结果均以双侧P0.05),详见表2,而肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、IL-10及MMP-9表达情况均对患者的生存期有显著影响(P 　　肿瘤浸润和转移的先决条件是破坏基底膜的完整性,这一过程为瘤细胞与细胞外基质相互作用的结果,基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPS)是锌依赖性内切酶超家族,几乎能够降解细胞外基质的所有成分,其中MMP-9是MMPS中相对分子质量最大的酶,它以酶原形式分泌,被激活后形成IV型胶原酶,降解细胞外基质和IV、V、VII、X型基底膜胶原,增强肿瘤新生血管的形成,从而促进肿瘤侵袭和转移。MMP-9在胃癌、NSCLC、肝癌等肿瘤组织中均增高[8]。20%～65% NSCLC病理组织中均发现有MMP-9[9],可见MMP-9首先通过破坏肿瘤细胞周围的物理屏障,使其易于发生浸润和转移。Pinto[10]研究显示,MMP-9的过度表达与肿瘤的发生发展密切相关。本研究亦表明,MMP-9的阳性表达在NSCLC中明显高于肺良性病变组织,且随着TNM分期的增加,MMP9表达的阳性率显著增高,提示MMP-9参与NSCLC肿瘤转移的晚期过程,与NSCLC的侵袭和转移密切相关,可用于评估病情。 　　肿瘤的转移同时需伴随着新生血管的生成。大量实验证明,癌细胞侵袭