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丙酮沉淀法提取杠板归多糖工艺研究 　　摘要：目的：探讨丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。方法：以杠板归为研究对象，以水为溶剂提取杠板归多糖，提取液用丙酮进行沉淀，选取离心时间、沉淀时间和沉淀剂用量3个因素做单因素进行正交实验，探索最佳提取条件。结果：丙酮加入量75 ml、沉淀时间18 h和离心时间18 min是丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。结论：确定了丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。 　　关键词：杠板归；多糖；丙酮沉淀法；正交试验 　　中图分类号：06—332 文献标志码：A 文章编号：1008—2409（2012）04—0484—03 　　杠板归（Perfoliate Knotweed Herb），植物学名为：Polygonum perfoliatum，为双子叶植物，蓼生草本属蓼科植物。近年来主要是对杠板归的黄酮类、蒽醌类、苯丙素等成分研究Ⅲ。我国民间常用于化瘀补血，清热解毒，活血化瘀等，近年动物实验表明杠板归对肿瘤有抑制作用。杠板归含有酚类、有机酸、生物碱、氨基酸、鞣质、黄酮、蒽醌、甙类、糖类、植物甾醇及三萜类等化学成分，具有利水消肿、清热解毒和止咳作用。用于肾炎水肿、百日咳、泻痢、湿疹和疖的治疗。目前关于杠板归多糖的丙酮浸提工艺的研究尚未见报道，笔者通过单因素实验和正交实验初步探讨丙酮沉淀法提取杠板归的最佳工艺，为杠板归资源的开发与利用提供实验和理论依据。 　　1 材料、仪器与实验方法 　　1.1 实验材料 　　研究对象：杠板归，于2011年7月5日采自广西壮族自治区南宁，经广西中医学院药用植物教研室韦松基教授鉴定为真品，且药材符合《中国药典》2010版相关项目规定，阴干，粉碎，备用。 　　1.2 实验试剂 　　丙酮，95%乙醇，均为AR，西陇化工股份有限公司；无水石油醚，为AR，成都市科龙化工试剂厂。 　　1.3 实验仪器 　　HH—S恒温水浴锅，南上海特迅公司生产；台式离心机TDL80—2B，上海安亭科学仪器厂生产；B2200S—T台式超声波清洗机南上海之信仪器公司生产；玻璃仪器气流烘干机，陕西常仪实业公司生产；UV—9600紫外可见分光光度计，日本岛津公司生产。 　　1.4 实验方法 　　1.4.1 实验总流程 杠板归→取样→剪碎→温水浸提→沉淀剂沉淀→离心得沉淀物→无水乙醇、丙酮、无水石油醚交替搅拌洗涤2次→干燥→得粗杠板归多糖→称量。 　　1.4.2 丙酮沉淀法的实验研究 用浸提温度70℃，浸提时间60 min，液固比25：1，浸提次数为2次的浸提液，选取丙酮做沉淀剂，按照不同的实验条件分别沉淀浸提液中的多糖，离心后，干燥6 h，称重。 　　1.4.3 单因素实验 离心时间的影响：取浸提液50 ml，选取浸提液：丙酮为1：2进行沉淀操作，静置时间为15 h，离心时间分别为9 min，12 min，15 min，18 min，21 min（4 000 r/min），沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、无水石油醚交替搅拌洗涤2次，干燥后称重，分析离心时间的影响。沉淀时间的影响：取浸提液50 ml，选取浸提液：丙酮为1：2进入沉淀操作，分别静置9，12，15，18，21 h，然后离心15 min（4 000r/min），沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、无水石油醚交替搅拌洗涤2次，干燥后称重，分析沉淀时间的影响。丙酮加入量的影响：取浸提液50 ml，丙酮分别为1.5：1，1：1，1：1.5，1：2，1：2.5加入到浸提液中，静置15 h，然后离心15 min（4 000 r/min），沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、无水石油醚交替搅拌洗涤2次，真空干燥后称重，分析沉淀剂加入量的影响。 　　1.4.4 丙酮沉淀法正交实验设计 南单因素实验结果确定一个3因素、3水平的正交实验，3因素分别为离心时间、沉淀时间、丙酮加入量；离心时间的3个水平分别是13，15，17 min；沉淀时间的3个水平分别是10，12，14 h；浸提液：丙酮的3个水平分别是1：1，1：1.5，1：2；离心机转速为4 000 r/min，沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、无水石油醚交替搅拌洗涤2次，干燥后称重，得出较佳的实验条件。 　　2 结果与讨论 　　2.1 单因素实验结果 　　2.1.1 离心时间对提取粗杠板归多糖的影响 　　离心时间为9，12，15，18，25 min时，杠板归多糖沉淀分别2.3，2.8，3.3，3.7，和3.8 mg，随着时间的延长，杠板归多糖沉淀量增加，18 min以后趋于平缓，所以离心时间18 min左右较好。 　　2.1.2 沉淀时间对提取粗杠板归多糖含量的影响沉淀时间为9，12，15，18，21 h时，获得粗杠板归多糖得的量分别为1.2，1.8，2.9，2.9和2.6 mg，随着沉淀时间的延长，杠板归多糖沉淀量增加，