生科第五章 酶PPT.ppt

3. 酸碱催化 酶活性中心上的某些基团可以作为良好的质子供体或质子受体对底物进行酸碱催化。 蛋白质中起酸或碱催化的功能基团有氨基、羧基、咪唑基、巯基和酚基。 4. 共价催化 底物分子与酶分子生成不稳定的共价中间物，再进一步生成产物，快速完成反应。 Zn Zn Glu270 Tyr248 Arg145 底物 羧肽酶结合底物前后构象变化 羧肽酶活性中心必需基团与底物间的结合 溶菌酶-底物复合物 A B C D E F 酶切位点 溶菌酶活性中心与底物结合示意图 Asp52 Glu35 （极性区） （非极性区） 七、酶促反应动力学 一、酶反应速度的概念 用一定时间内底物的消耗量或产物的生成量来表示酶促反应速度。测定反应的初速度。 10 20 30 40 50 60 min 产物生成量 酶反应进程曲线 在有足够底物和其他条件不变的情况下： v = k [E] 二、底物浓度对酶作用的影响 1. 底物浓度对酶反应速度的影响 [S] v Vmax 一级反应 v = k [S] 零级反应 v = k [E] 当底物浓度较低时 反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。 [S] V Vmax 随着底物浓度的增高 反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。 [S] V Vmax 当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应 [S] V Vmax 用中间产物学说解释底物浓度与反应速度关系曲线： 当底物浓度很低时，有多余的酶没与底物结合，随着底物浓度的增加，ES数量不断增高，反应速度随之增加。 当底物浓度较高时，溶液中的酶全部与底物结合成中间产物，虽增加底物浓度也不会有更多的ES生成，所以反应速度几乎不变。 E + S ES E + P E + S k1 k2 k3 ES E + P 2. 米氏方程式（Michaelis-Menten equation） ——用于表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的方程式。 设 km= —— k2 + k3 k1 v = —————— Vmax · [S] km + [S] 当km＞＞[S] 时，v=(Vmax/Km) [S], 即v 与[S]成正比。 当km ＜＜[S]时，v ?Vmax，即[S]?而v不变。 Km — 米氏常数 Vmax — 最大反应速度 米氏方程的推导 令： 将（4）代入（3），则： [ES]生成速度： ，[ES]分解速度： 即： 则： (1) 经整理得： 由于酶促反应速度由[ES]决定，即 ，所以 (2) 将（2）代入（1）得： (3) 当酶反应体系处于恒态时： 当[Et]=[ES]时， (4) 所以 当反应速度为最大反应速度一半时，v=Vmax/2， Km＝[S] 1. Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 ∵ km= （k2 +k3)/k1 当k2＞＞k3时， Km ≈ k2 / k1 ∴ km可以表示酶和底物的亲和力。 2. km大，说明ES容易解离，酶与底物结合的亲和力小。 E + S k1 k2 k3 ES E + P 3. 米氏常数的测定 通常用Lineweaver-Burk作图法（双倒数作图法） —— 1 v = —— km V · —— [S] 1 + —— V 1 （y = ax + b） 斜率= km/Vmax 1/ [S] 1/v 1/Vmax -1/km 米氏常数的意义 当v=Vmax/2时，Km=[S] 。∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 是酶在一定条件下的特征物理常数，其大小与酶的浓度无关，而与具体的底物有关，且随着温度、pH和离子强度而改变。通过测定Km的数值，可鉴别酶。 可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，E对S的亲合力愈大，Km愈大，E对S的亲合力愈小。 一、抑制剂（inhibitor）的影响 ——使酶的必需基团或活性部位中的基团的化学性质改变而降低酶活力甚至使酶失活的物质，称为抑制剂（I）。 类型： 不可逆抑制剂 可逆抑制剂 竞争性抑制 非竞争性抑制 6.7 影响酶促反应速率的因素 1. 不可逆抑制作用(irreversible inhibition) ——抑制剂与酶的结合（共价键）是不可逆反应。不能用透析等方法除去抑制剂而恢复酶活力。 S + E ES E + P + I ↓ EI E—SH +ICH2