细菌内毒素检查法与家兔法同步检测丹参川芎嗪注射液热原比较.docVIP

细菌内毒素检查法与家兔法同步检测丹参川芎嗪注射液热原比较 　　[摘要] 目的 考察细菌内毒素检查法和家兔法对丹参川芎嗪注射液检查的可行性。 方法 采用《中国药典》2010年版一部附录细菌内毒素检查法，对家兔试验进行比较试验。结果 丹参川芎嗪注射液稀释至160倍时，用灵敏度为0.06 EU/ml的鲎试剂进行实验，干扰消失。家兔热原检查法与细菌内毒素检查法相吻合。结论 采用细菌内毒素检查法和家兔检查法检测丹参川芎嗪注射液热原均可行。 　　[关键词] 丹参川芎嗪注射液；细菌内毒素；干扰试验；热原 　　[中图分类号] R927.12 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）12（c）-0101-03 　　丹参川芎嗪注射液为复方制剂，其组分为盐酸川芎嗪和丹参素。临床用于闭塞性脑血管疾病，如脑供血不足、脑血栓形成、脑栓塞及其他缺血性心血管疾病[1]。目前《中国药典》2010年版并未收录该品种，本品的现行标准是国家药品监督管理局国家药品标准（试行）WS-10001-（HD-1138）-2002，该标准规定了热原检查法，参照《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅧB中药注射剂安全性检查法应用指导原则，该标准的热原检查剂量设计不符合《中国药典》规定，而且无细菌内毒素检查的规定。为此，本文对本品进行了细菌内毒素检查和热原检查的方法进行研究，报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器 　　MS-1型旋涡振荡器（德国IKA）；SUB14型四孔水浴锅（英国GRANT）。 　　1.2 试剂 　　鲎试剂（TAL）：规格均为0.1 ml/支，湛江安度斯生物有限公司，批号为1109011和1305131，标示灵敏度分别为0.25 EU/ml和0.06 EU/ml；福州新北生物工业有限公司，批号12070312，标示灵敏度（λ）分别为0.25 EU/ml和0.06 EU/ml。细菌内毒素工作标准品（CSE）：中国药品生物制品检定所，批号为150601-201174，规格 160 EU/支。细菌内毒素检查用水（BET水）：湛江安度斯生物有限公司，批号为 1109020，规格 50 ml/支。 　　1.3 试药 　　丹参川芎嗪注射液：贵州拜特制药有限公司生产，规格 5 ml/支，批号001002002；万生联合制药有限公司生产，规格 5 ml/支，批号 　　1.4 实验动物 　　取12只新西兰健康兔，体重2.0～3.0 kg，把家兔按体重均匀分成4组，每批3只。动物和饲料来源：广州花都信华实验动物养殖场，实验动物生产许可证编号SCXK（粤）2009-0023；动物饲养环境温度 20～25℃，湿度 40%～70%。 　　1.5 方法 　　1.5.1 鲎试剂标示灵敏度的复核 　　根据鲎试剂灵敏度的标示值，将以上各批鲎试剂用内毒素标准溶液进行灵敏度的复核[2]。 　　1.5.2 丹参川芎嗪注射液细菌内毒素限值（L）的确定 　　根据中国药典2010年版一部中细菌内毒素检查法的规定， L=K/M，L为供试品的细菌内毒素限值，K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5 EU/（kg·h），M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60 kg计算，注射时间若不足1 h，按1 h计算[2-4]。 　　根据产品的使用说明书（用法用量）中一般用法为5%葡萄糖注射液或生理盐水250～500 ml稀释，每次5～10 ml，故成人临床最大供试品剂量按10 ml计算，人均体重按60 kg计算，滴注时间按1 h计算，则M=10 ml/[60（kg·h）] =0.17 ml/（kg·h），L= K/M =5 EU/（kg·h） /0.17 ml/（kg·h）=30 EU/ml。考虑到老人安全用药，根据注射剂安全性检查法应用指导原则（修订稿），调整限值到计算限值的3倍，确定丹参川芎嗪注射液细菌内毒素限值为10 EU/ml。 　　1.5.3 丹参川芎嗪注射液的干扰预试验稀释倍数的确定 　　将样品使用市面上最大灵敏度0.5 EU/ml鲎试剂计算，MVD=λ/L，L=10 EU/ml。因此样品稀释倍数定为为20、40、80、160、320倍[2，4]。 　　1.5.4 干扰预试验 　　取4批丹参川芎嗪注射液，分别加BET水稀释至20、40、80、160、320倍，用酸度计测定pH值，均为6.6～7.0，符合细菌内毒素检查的pH值要求，稀释后样品为供试品管（NPC），将稀释液分别按1∶1比例加入0.5 EU/ml细菌内毒素标准溶液，为供试品阳性对照管（PPC）。使用两个厂家的鲎试剂（灵敏度为