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细胞分子免疫学欧盟印迹法检测NA多肽抗体谱hongxiaowu
抗核抗体谱(IgG)检测试剂盒 - （免疫印迹法） 洪晓武 2014-11-12 适应症 Sharp综合症（混合性结缔组织病,MCTD） 系统性红斑狼疮(SLE) 干燥综合征(Sjoetren’s syndrome) 进行性系统性硬化症（PSS) 多肌炎/皮肌炎（PM) 临床意义 高低度nRNP抗体是Sharp综合症的标志，抗体滴度与疾病活动性相关； Sm抗体是散播性红斑狼疮的特异性抗体； SS-A抗体与各类自身免疫性疾病相关，常见于干燥综合征患者； SS-B抗体仅见于干燥综合征和散播性红斑狼疮女性患者； Scl-70抗体见于25%-75%的进行性系统性硬化症患者； Jo-1抗体见于多肌炎，常与肺间质纤维化相关。 实验原理 核抗原的组成部分： 组蛋白； DNA; 可溶性核抗原：因为其可以溶解于PBS或NS中，故被称为可提取核抗原（extractable nuclear antigen,ENA) 目前已经发现人体内有多种针对ENA的自身抗体， 包括抗Nrnp,Sm,SS-A,SS-B,Scl-70和Jo-1等，总称为抗ENA抗体 实验原理 试剂盒提供抗nRNP 、 Sm、SS-A、SS-B、Scl-70和Jo-1等抗原的人IgG自身抗体的检测；试剂盒载片上每个反应区内固定了相应抗原； 实验首先将样本血清与膜条温育，如果标本为阳性，则其特异性的IgG抗体将与相应抗原位点结合； 采用酶标记的抗人IgG（二抗）进行第二步温育，如果膜条上已有结合的样本中的抗体，则二抗可以在相应抗原位点结合标本中的抗体（AP 碱性磷酸酶 ）； 加入酶底物显色，检测已结合的样本中的抗体 【 NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴 -4-氯啶-磷酸盐）， 在蛋白转印膜阳性蛋白条带处原位形成蓝紫色的化合物沉淀) 】 实验步骤：准备 所有试剂平衡至室温； 稀释酶结合物：样本缓冲液10倍稀释； 稀释清洗缓冲液：蒸馏水10倍稀释； 稀释实验样本血清：样本缓冲液10倍稀释。 实验步骤： 预处理 将检测膜条放入温育槽中，并在每槽中加入1.5ml样本缓冲液。 5分钟 室温温育 第1步：温育 吸取槽内液体，在温育槽中分别加入50ul已稀释（1:10）血清 30分钟 室温温育 清洗 用一次性滴管吸取已稀释清洗缓冲液（1：10）冲洗反应区2~3次，并清洗槽，风干 第2步：温育 在槽内分别加入50ul酶结合物。 30分钟 清洗 用清洗缓冲液清洗膜条3次，清洗槽。 摇摆摇床温育 第3步：温育 清洗槽，在槽内分别加入50ul底物液 10分钟 终止 吸取槽内液体，用蒸馏水清洗3次，每次1.5ml 判断结果 目测或EUROLINE软件 室温温育 清洗方法 注意事项 试剂盒所有组分应当做潜在传染源处理。 若试剂与皮肤接触，应立即用肥皂和大量水冲洗。 如果操作正确，那么显色与否与显色深浅提示临床病人患病与否与体征严重程度，一般呈正相关。 Thank you！
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