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一 基因工程与食品 目的：将酶以外的所有的杂质尽可能的除去。 如何检查一种酶制剂是否达到了纯的制剂？ 要检测酶的制剂是否达到纯的制剂（即不含杂质及杂质酶），可以有以下几种方法： （1） 层析法：包括纸层析、凝胶层析、柱层析及亲和层析 （2） 电泳法：包括SDS凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法 （3） 超离心法：不同的酶分子大小不同，在重力场中具有不同的沉降系数，从而可以通过超离心方法分离目的酶与杂质酶。 （4） 免疫反应法：由于酶分子可作为一种抗原物质，而抗原与抗体之间具有专一的亲和力，故可选用目的酶的抗体与酶制剂进行免疫扩散或免疫电泳，从而判断酶的制剂是否纯净。 （5） 氨基酸序列分析法：采用特定的化学物质从酶的N末端将氨基酸残基逐个水解下来，最终可获知该酶的氨基酸序列，从而也可以判断出酶制剂是否纯净。 有三种酶蛋白，其相对分子质量和等电点各不相同，试设计一个方案来分离纯化这三种蛋白质。 【1、沉淀， 2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。 3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 4、层析：a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定PH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。 b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。 5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其密度与形态各不相同而分开。】 细胞破碎的目的、方法及原理。 目的：许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。 方法及原理： a机械破碎--通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。--捣碎法 研磨法 匀浆法 b物理破碎--通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎。--温度差破碎法 压力差破碎法 超声波破碎法 c化学破碎--通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎---有机溶剂：甲苯、丙酮 丁醇、氯仿 表面活性剂：Triton、Tween d酶促破碎--通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎--自溶法 外加酶制剂法 5 常用沉淀法的种类及原理。盐析法分离蛋白质的原理。 沉淀分离方法 分离原理 【盐析沉淀法】 利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离 【等电点沉淀法】 利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性，通过调节溶液的pH值，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离 【有机溶剂沉淀法】 利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离 【复合沉淀法】 在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，从而使酶与杂质分离 6?酶固定化后性质会发生什么变化？原因是什么？ 水溶性酶与水不溶性载体通过固定化技术结合形成水不溶性酶。 固定化酶的特点： 优点：1.不溶于水，易于与产物分离； 2.可反复使用； 3.可连续化生产； 4.稳定性好。 缺点：固定化过程中往往会引起酶的失活 网络【1稳定性一般比游离酶的稳定性好如对热的稳定性、保存稳定性、抵抗性、对变性及的耐受性等  2最适温度一般与游离酶差不多但是有些固定化酶的最适温度与游离酶相比有比较明显的变化  3最适pH值往往会发生变化需要引起注意。因素有两个载体的带电性质和催化反应产物的性质  4底物特异性可能有所不同其变化与底物分子质量的大小有一定关系。对于低分子量的底物变化前后不大。特异性的改变时由于载体空间位组作用引起的大分子底物难于接近酶而使催化速度大大减低】 7 简述酶的提取方法及影响酶提取的主要因素。 8试论述如何利用本章所学的各种分析技术对特定的蛋白酶进行酶学性质（如分子质量、pI、带电状态、亚基组成、溶解性等）研究。 9 层析在实验室和工业化生产中应用很广泛，何为层析？简述常用的三种层析分离方法的原理及适用范围。 层析技术是近代生物化学实验中常用的分析方法之一，任何层析过程都是在两个相中进行的。一是固定于支持物上的固定相，另一是流经固定相的流动相，由于样品中各组分理化性质（如溶解度、吸附能力、分子形状、分子所带电荷的性质和数量、分子表面的特殊基团、分子量等）不同，表现出对固定相和流动相的亲和力各不相同。当