AFLP标记对灯盏花遗传多样性及选育品系群体一致性分析.docVIP

AFLP标记对灯盏花遗传多样性及选育品系群体一致性分析 　　[摘要] 目的：对灯盏花群体种质资源进行分析，为灯盏花的品种选育提供依据。 　　方法：用筛选出来的11对引物对采自云南泸西、昆明、大理、丘北、石林的6份灯盏花种质资源进行AFLP遗传多样性分析。 　　结果： ①11个引物在6份种质资源中共产生636条DNA片段，其中604条带为多态性条带，约占82.40%。 ②在相似系数为0.706时，6份不同地区的灯盏花可聚为3类，第1类包括千山1号和千山2号大部分样品及大理、石林、昆明3个地区的野生居群；第2类为丘北的野生居群；第3类主要为部分千山2号及其他地区样品。千山1号和千山2号灯盏花平均遗传相似系数大，遗传相似系数变幅小，品系内遗传分化较小，遗传性状较稳定； ③对6份灯盏花样品的分子系统聚类分析表明：地理来源相同的部分有相对聚合现象或少部分品系出现交差聚类，与其亲缘关系较近有关；丘北居群自行一类，与其特异的遗传基础差异较大有关。 　　结论：AFLP对灯盏花的遗传多样性分析具有可靠性；系统选育对灯盏花的育种具有可行性。 　　[关键词]灯盏花；AFLP；遗传多样性；选育品系 　　灯盏花Erigeron breviscapus（Vant）Hand.-Mazz.为菊科Asteraceae飞蓬属Erigeron L.多年生草本植物[1]，又名灯盏细辛或短葶飞蓬，主要分布于我国西部和西南部的云南、四川、贵州、广西、西藏、湖南等省（区）[2]。具有散寒解表、祛风除湿、舒筋活血、消积止痛等功效，灯盏花的主要化学成分灯盏乙素是治疗闭塞性脑血管疾病和脑溢血后遗症的天然特效药物[3]，云南省灯盏花常年采集量在1 000 t以上，近年对云南省灯盏花原分布区进行资源调查时，已难见到有成片的灯盏花，植株分布频度已接近稀少或枯竭[4]。灯盏花的人工育种和栽培愈来愈重要，但由于灯盏花栽培历史短，育种研究基础薄弱。 　　在系统考察云南灯盏花种质资源的基础上，采集种质资源并建立了种质资源圃[4]。经过多年的引种驯化研究与实践，在云南省泸西县收集野生种质资源，用系统选育法从中筛选出灯盏乙素达到2.46%～2.70%，灯盏乙素达到68.24～90.60 kg·hm-2的灯盏花优质种源3份[5]。灯盏花为异花授粉植物[6-8]，天然异交群体内??异丰富[9-12]。变异系数达50.00% [13]，因此可以通过选择育种的方法，充分利用居群水平和居群水平以下的个体间的遗传变异，筛选选育优质种源或选育优质品种[14]。经过对灯盏花种植技术及栽培习性等方面进行了研究，对种质资源的筛选，选用了采自云南省泸西、丘北、个旧等地QS-1至QS-6等6份种源进行了实验比较，种源QS-1，QS-3和QS-6在产量和有效成分含量方面表现较好，引种栽培后的灯盏花个体较野生条件下大[5]。同样用系统育种的方法，从驯化栽培的灯盏花天然异交群体中选择单株，得到的2个灯盏花新品系灯盏乙素和单产都比对照提高[15]。但是目前这些选育出来的品系都缺乏对群体一致性的研究。 　　目前已采用生物学特性及表型的分析[16]，等位酶分析[12]，RAPD技术[17-18]，ISSR分析[19]等技术对灯盏花遗传多样性进行了初步研究，研究表明灯盏花种质资源有较高的遗传多样性。AFLP标记是对基因组DNA进行分析的分子标记技术，与其他的分子标记技术相比，它可以在全基因组范围内对多个不同的遗传位点同时进行变异分析，而较少受到基因组特征性序列的影响，是进行遗传多样性分析及分子鉴别的首选技术之一[20]。 　　本文利用优化过的AFLP分子标记方法[21]，对系统选育出的、在生产上广泛应用的2个灯盏花品系（千山1号，千山2号）以及云南一些野生居群进行了遗传比较分析，检测灯盏花系统选育的效果，探明AFLP标记在灯盏花选育品系内及品系间的遗传检测的适用性，同时对灯盏花不同地理居群的亲缘关系做了分析，为灯盏花种质资源的利用和遗传改良提供依据。 　　1 材料 　　材料选自泸西千山公司所培育的千山1号（QS-1）、千山2号（QS-2），以及作为对照的采自石林、昆明、大理、丘北野生居群的样品。经云南农业大学杨生超教授鉴定，样品为灯盏花E. breviscapus。 　　高速台式微量冷冻离心机（日本HITACHI）、数显恒温水浴锅（国华电器有限公司HH-4）、电泳仪（北京六一）、制冰机（SANYO SIM-F123）、高压蒸汽灭菌锅（SANYO）、冰箱（中科美菱）、超低温冰箱（Haier）、梯度PCR仪（biometra 070-851）、凝胶成像系统（UVP S/N A030711-002）。 　　2 方法 　　2.1 试验设计 　　用优化过的AFLP体系进行实验[21]。用限制性内切酶EcoRI和