利用单克隆抗体特异性敲除技术解析中药药效物质基础新方法.docVIP

利用单克隆抗体特异性敲除技术解析中药药效物质基础新方法 　　摘要 中药药效物质基础研究是实现中药现代化的关键问题之一。作者将小分子单克隆抗体技术引入中药药效物质基础研究，利用中药活性成分的单克隆抗体制备相应的免疫亲和色谱柱，实现从药材或复方中特异性地“敲除”该化合物，而“原样”保留其他成分在量和比例关系上不变，通过药理药效的比较研究，来明确揭示该成分与整体中药或复方功能主治的关联度。利用单克隆抗体特异性敲除技术解析中药药效物质基础，是符合中药自身特点的药效物质基础研究新方法，获得的研究结果不仅有助于从全新的角度理解物质基础，而且有助于理解中药单味药内部，或复方药味之间“配伍”的现代科学意义。 　　关键词 中药药效物质基础；小分子单克隆抗体；免疫亲和色谱；特异性敲除 　　收稿日期 2013-01-05 　　基金项目 国家自然科学基金项目81274043）；教育部新世纪优秀人才培养计划项目（NCET-04-0140） 　　通信作者 *王庆国，教授，博士生导师，Tel：（010E-mail： wangqg8558@ 　　作者简介 赵琰，研究员，博士生导师，研究方向为中药免疫分析技术，Tel：（010E-mail： zhaoyandr@ 中药药效物质是保证中药发挥疗效的根本。中药药效物质基础的研究，不仅是中药质量控制和作用机制研究的前提和基础，也是传统医学与现代医学之间最易实现沟通并形成共识的研究领域，是实现中药现代化的关键问题之一。构建符合中药自身特点的药效物质基础研究方法，有助于在该研究领域取得突破。 　　1 目前中药药效物质基础研究的思路与技术方法 　　目前国内外学者开展中药化学成分与其功效间关联度研究的思路，主要基于“还原论”的原理。其实现的技术手段有多种：或者采取“追踪分离法”，即以药理药效学指标为“眼睛”或导向，采用化学分离分析技术方法，追踪分离直至寻找到其中的活性单体化合物或者组分，以其有效性作为判断其与药物功效间关联度的依据；或者以“血清药理学”方法通过分析比较体内代谢产物与原药材间的共性成分，进而通过药理药效学指标进行判断，等等。这些研究思???所采取的技术手段虽然不同，但实质是相同的，即通过对不同途径获得的孤立的化合物进行药理活性或药效评价，以评价结果作为判断该成分是否与药物整体功效主治相关，及相关性强弱的依据。以上研究方法所得到的结论，虽然可以用于推测某一单体成分与药物功效间是否存在相关性，但并不能提供直接和确切的证据以说明其在整体药效作用中的贡献度。 　　究其根本原因，是由于中药的特殊性造成的。首先，由于中药即使是单味药物，本身也是一个由多样性成分构成的复杂体系，其中某种单体成分在独立干预动物或人体时所具有的某方面的药理和药效特征，在与其他成分共同作用时，必然受到其他成分药理和药效作用的影响。也就是说，中药多种成分之间存在着协同、拮抗等多种相互作用，共同形成某味中药独特的功效。因此，已经“被孤立”的某种化学成分的药理活性，与“处于整体”中的药理活性，简单化地等同起来，是目前研究者思考中药和复方物质基础或有效成分的基本理念。这也使得难以对某一化学成分是否是体现该药物功效的物质基础，或者说与该药物功效的关联度做出客观全面的评价。造成目前困惑的原因在于，还尚未建立评价药材或复方中某一“代表性成分”在药物整体功效中贡献度的思路与相应的技术路径。 　　事实上专家学者们早已注意到了这个问题，即中药或复方中一种或多种单体化合物的活性并不能完全反映其在药物中所发挥的作用。确认某一成分与某味药物功效主治的关联性，不能忽略其与其他成分之间的作用关系，需要将其放在整体中进行阐释。因此，应该改变思路，从全新的角度思考中药物质基础的研究思路和技术方法[1]。 　　2 特异性敲除法研究物质基础的思路 　　2.1 基本原理 　　用特异性敲除法研究药物成分与该药物功效间关联度的原理类似于“基因敲除”。以基因敲除小鼠为例，知道目前已获得了小鼠的全基因图谱，在研究某一特定基因的功能时，通过基因敲除技术从全基因中将该目标基因敲除，然后通过对比分析敲除前后生理效应的变化，即可揭示该基因的功能。目前证明这是一种研究特定基因功能的有效途径而被广泛采用。同样地，中药的化学成分也是复杂多样的，某一特定成分在整体药味中的作用亦可通过比较分析将其敲除前后功效的变化，揭示该成分与整体药物功效间的相关性。 　　2.2 技术策略 　　2.2.1 是否有关联 可通过对比分析目标活性成分从药物整体中敲除前后药理和药效的差异，揭示该目标成分与整体药物功效的关联度。 　　2.2.2 关联度的大小 可通过改变目标活性成分的含量加以实现。在敲除目标成分后的药材提取物中，以原药材或复方中目