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PAGE 以含釕黃血鹽修飾碳糊電極對偵測葡萄糖生醫感測器之靈敏度的研究 廖國翔、林庭立、林浩 南台科技大學化學工程與材料工程系 摘要--葡萄糖生醫感測器為重要之研究主題，葡萄糖和氧氣受葡萄糖氧化酵素催化，將葡萄糖氧化成葡萄糖酸並將氧氣還原成過氧化氫，即利用電極表面於固定之還原電位下釋出電子，將電子傳媒(Mediator)變成還原態，再藉由電子傳媒之還原態釋出電子催化還原過氧化氫成水，而電子傳媒由還原態變成氧化態，利用所得之電流信號之大小，即可計算出過氧化氫的含量，進而推算葡萄糖之濃度。本研究主要利用含釕黃血鹽來修飾碳糊電極，而含釕黃血鹽本身具有強催化性能，與具有導電性能的碳粉製作成碳糊電極可藉以提升過氧化氫之應答電流，在磷酸鹽緩衝溶液中偵測過氧化氫之應答電流，計算過氧化氫之濃度，藉以推算葡萄糖之濃度。在30℃下，以含釕黃血鹽修飾碳糊電極[含釕黃血鹽：碳粉=3：7(重量比)] ，操作電位為-200 mV，攪拌速率為600 rpm，以0.05 M 磷酸鹽緩衝溶液（pH＝7.4）偵測過氧化氫之應答電流，可得偵測極限為0.02 mM H2O2，線性範圍為 0.02~2.7 mM H2O2，R2為0.9996，靈敏度為661.8 μA/cm2．mM H2O2。而酵素碳糊電極的偵測極限為 0.02 mM C6H12O6，線性範圍為 0.02~2.56 mM C6H12O6，R2 值為0.999，靈敏度為4.11 μA/cm2?mM C6H12 關鍵字：含釕黃血鹽、碳糊電極、葡萄糖生醫感測器、靈敏度 一、前言 感測器是一種將已知或未知的待測物理量或化學量，轉換為可測量的信號的運作組件。感測器在1960年代被提出，而在1970年代商業化以後，即被視為增進生活品質、改善工業製程、探討生命科學的重要科技。1962 年 Clark 和 Lyons兩人提出酵素電極的觀念以後為生醫感測器( Biosensor ) 的發展開啟新的一頁，而接下來在 1967 年 Updike 和 Hicks 嘗試以葡萄糖氧化酵素( Glucose Oxidase ) 固定於薄膜中，以溶氧電極為基礎結合酵素之電極來分析溶液中的氧消耗量，進而推算樣品中的葡萄糖含量，自此開啟了各式以酵素為生物辨識元件之生醫感測器的研究風潮。葡萄糖與氧氣經酵素催化生成葡萄糖酸及過氧化氫，故本研究欲利用氧化還原反應所產生之電流以偵測過氧化氫進而檢測葡萄糖含量，其偵測原理即利用電極表面於固定之還原或氧化電位下釋出電子，將電子傳媒(Mediator)變成還原態;再藉由電子傳媒之還原態釋出電子催化還原 H2O2成H2O，而電子傳媒將由還原態變成氧化態；利用所得之電流訊號之大小，即可計算出過氧化氫的含量，進而推算葡萄糖之濃度，本研究以含釕黃血鹽為電子傳媒來修飾碳糊，先檢測過氧化氫來評估可行性與電極的效能，再將葡萄糖氧化酵素固定在電極上，利用電化學的方法來檢測葡萄糖分子，利用Nafion將葡萄糖氧化酵素固定在碳糊電極上，完成酵素電極之製作。 二、實驗部份 2.1 儀器 電化學分析儀(CHI 614A, CH Instruments, Inc)；對分析物活性作循環伏安法[Cyclic Voltammetry(CV)]測定及以Time Base (TB)操 作模式偵測過氧化氫及葡萄糖反應之應答電流。圈繞白金絲作為輔助電極，自製 Ag/AgCl 電極作為參考電極，修飾碳糊電極作工作電極成三電極系統。 2.2 藥品 黃血鹽(Potassium Hexacyanoferrate(II)， MERCK )；三氯化釕(Ruthenium Trichloride， ACROS)；石墨碳粉(Graphite Carbon Powder， 關東化學株式會社)；葡萄糖氧化酵素(Glucose Peroxide，Sigma)；碳漿(Carbon Paste，景鴻塗料有限公司)；葡萄糖（D（+）-Glucose Monohydrate， MERCK）；Nafion（Nafion?，Fluka）；環己酮(Cyclohexanone，C6H10O，日本小島化學)；磷酸二氫鉀(Potassium Dihydrogenphosphate，KH2PO4，林純藥工業株式會社) ；氯化鉀(Potassium Chloride，關東化學株式會社)。 2.3實驗步驟 2.3.1 含釕黃血鹽粉體之製備 配製0.003 M三氯化釕水溶液(a液)及30 mM黃血鹽水溶液(b液)，將二種水溶液等體積混合之後可得到含釕黃血鹽懸浮溶液(c液)，將c液高速離心，其沉澱物以超純水洗滌，如此重覆離心洗滌三次，最後將獲得之沉澱物置入烘箱以60℃ 2.3.2 工作電極之製備 取一長7cm之單芯銅電線，電線內徑為0.05cm，切除前後二端各0. 2.3.3