部分ifox-hunting突变体的表型鉴定及功能初步分析-phenotypic identification and functional analysis of some ifox - hunting mutants.docxVIP

华中农业大学2016届硕士研究生学位论文3．2．2Bnll81的亚细胞定位．223．2．3与窄叶表型相关基因在突变体rsl-1181中的表达检测．．233．3结果与分析．253_3．1突变体rsl-1181出现窄叶表型．．．．．．．．．．．．．．253．3．2突变体rsl．1181调控叶形的机制．．274讨{仑．304．1Bnl327基因对叶片衰老的影响．．．304．2砌．『J『艿J对叶形的影响一．31参考文献．．32附录．．37致谢．．38II万方数据部分iFox-Hunting突变体的表型鉴定及功能初步分析摘要叶片是植物最主要的组成部分，是其于外界沟通的“门户”。叶片的数量多少、叶片面积大小、叶片的形态差异、衰老速度的快慢等对植物的生长发育、产量、品质均具有不同程度的影响。前期，本实验室构建了一个可诱导表达油菜基因的拟南芥功能获得型突变体库，并从中筛选获得了具有早衰和窄叶表型的突变体。这些突变体的获得，为培育油菜早熟新品种和新型的具合理叶形的新型油菜新品种提供了重要可能。本研究将在此基础上进一步将可在拟南芥中引起早衰表型的基因Bnl327以农杆菌为介导遗传转化油菜，以证明超量表达相同的油菜基因是否可使拟南芥和油菜产生相同的表型，以此来证明前期所构建的拟南芥突变体库，是否可用于研究油菜的功能基因组学。此外，本研究还对诱导表达突变体rsl．1181的表型特征及相关基因的表达进行了初步分析，主要结果如下：1、Bnl327转基因阳性植株的获得。利用农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化体系，把Bnl327基因转入冬陛甘蓝型油菜甲W76．I中，得到了To代阳性植株5株，经套袋自交后得Tl代群体。2、为明确超量表达Bnl327基因对油菜早衰性的影响，我们对田问3个月苗龄的Tl代转基因与对照植株具相同叶龄的叶片进行摘取并进行了黑暗处理，结果表明转基因叶片与对照叶片相比，叶片衰老速度明显加快：分子证据表明，转基因叶片内外源基因Bnl327的表达量也明显升高。这一研究结果说明，在油菜和拟南芥中超量表达相同的油菜基因可以引起基本一致的表型，说明前期构建的拟南芥功能获得性突变体库应该适合用于油菜功能基因组学的研究。3、用诱导剂对突变体rsl．1181处理14天后，发现该突变体的叶片由椭圆形变成窄长型，在第8周时窄叶表型趋于稳定，rsl一1181的叶长、叶面积均显著小于野生型，而叶宽则极显著小于野生型。此外，表型统计结果还表明，经诱导剂诱导后，与对照相比，突变体rsl-1181的主要生育期均有不同程度的推迟。4、为了进一步解析Bnll81基因调控叶形的分子机制，我们参考了Dubois等人提出的窄叶形成模式，并采用q．PCR来检测该模式中ERF6等几个主要基因的表万方数据华中农业大学2016届硕士研究生学位论文达差异。结果表明，经诱导表达后突变体rsl一1181叶片中这些关键基因的表达模式与Dubois等人的研究结果基本一致，说明突变体rsl-1181经诱导表达后窄叶形成的分子机制与Bnll81同ERF6基因(或所编码蛋白)间存在着的某种互作关系密切相关。关键词：油菜；功能获得性突变体；早衰；转基因：窄叶；分子机制万方数据部分iFox-Hunting突变体的表型鉴定及功能初步分析AbstractLeavesareimportantorgansofplantstocommunicatewimtheexternalenvironment．Leafnumber,morphology,speedofsenescencehasadegreeofinfluence012developmentofrapeseed．Previously,wehavegeneratedanArabidopsismutantionpoolthatectopicexpressingofBrassicafull-lengtheDNAlibrariesandhavescreenedoutmutantswitllphenoWpesofearlysenescenceandnarrowleaf．Thesetwomutantsmaybeusefulforprovidingnewinsightindevelopingnewvarietiesofrapeseed．Inthisstudy,Bnl327genewhichcausedanearlysenescenceinArabidopsiswastransformedbyAgrobacterium-mediatedgenetictransformationintoBrassicanapusinordertoseeifthesalTlegeneCancausethesamephenotypebothinArabidopsisandrapeseed．Ifthisis