白藜芦醇对转染tdp43的nsc34细胞的作用-effect of resveratrol on nsc 34 cells transfected with tdp 43.docxVIP

目录中文摘要l英文摘要4研究论文白藜芦醇对转染TDP一43的NSC34细胞的作用前言刚舌“一·一””””“一””一“一“一”一””一““一一”一··．．·一·· “一““·“”一一“一” “‘‘_／“·7 材料与方法8结果········一 ·········一 ············ ··········· ·········· 一·13 附图·· ··········· ············ ··············- ···········14 聪表一 ·一· ······“一“、9 讨论········· ············· ································20 参考文献23综述线粒体与神经变性疾病1 0 0 9 0 B 0 0 0 D O O O O O28致诩}·········· ··· ····························· ··················42 个人简历43中文摘要白藜芦醇对转染TDP-43的NSC34细胞的作用摘要肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis ALS)是一种选择性累 及上、下运动神经元的慢性进行性致死性神经系统变性疾病，其病因和发 病机制尚不清楚。很多研究表明氧化应激介导了神经元的死亡并在神经变 性疾病的发生发展中发挥着重要作用，因此抗氧化应激治疗相应地成为了 治疗ALS的一个重要方向。有研究发现在ALS患者的神经组织中存在异常的TDP．43(TAR．DNA bindingprotein)蛋白阳性包涵体，并出现该蛋白从核内到核外的异常分布。 TDP．43由位于人类l号染色体l p36．2上的TARDBP(transactive response DNA binding protein)基因的6个外显子编码。TARDBP基因序列高度保 守，广泛表达于多种组织。在后续的研究中证实，TDP．43在基因的表达调控方面起着重要作用， 包括：参与剪切囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)基因及载脂蛋白A II(ApoA．II)基因；通过富含甘氨酸的C末端与核内不均一糖核蛋白 (hnRNP)家族成员结合从而影响外显子跳跃接拼(exon skipping)、抑制剪接 活性；与运动神经元生存蛋白作用为核体提供支架；参与调节mRNA稳 定性、microRNA的生物合成、细胞凋亡和分裂；可能是调节神经元可塑 性的神经元活性反应因子等。近两年来，数个研究小组先后在不同人群的家族性ALS(familial ALS， FALS)和散发性ALS(sporadic ALS，SALS)患者中发现了TARDBP基因的 30多种突变，尤其以TDP．43Q331K与散发性ALS和TDP．43M337V与 家族型ALS的相关关系研究较多，种种证据都提示TARDBP基因的异常 与ALS的发生发展可能潜在相关，因此对这一基因功能及致病机制的研 究也逐步深入。本实验室已做的研究证实，在转染TDP．43 Q33 1K、M337V突变位 点的运动神经元细胞系(motor neuron．1ike cell line，简称NSC34)出现比转 染Empty vector、TDP．43 Wide type组显著的氧化损伤、线粒体功能的障 碍。中文摘要自藜芦醇(Resveratrol，简称Res)最早是由葡萄的皮和种子中提取的 一种植物抗毒素，化学名称为3，4’，5．三羟基一l，2一二苯乙烯(亦称芪三 酚)，是含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，其具有多种生物学活性：如 抗氧化作用，神经保护作用，抗肿瘤增殖作用，心血管保护作用，激活延 寿基因等作用。研究证实，白藜芦醇上述生物学活性中，最受关注的是抗 氧化清除自由基和神经保护作用。本研究应用稳定转染TDP．43 Q33 1 K和TDP．43 M337V的NSC34细 胞系作为ALS的细胞模型，深入研究不同浓度白藜芦醇对转染TDP．43 突变位点的NSC34细胞系的作用。以细胞增殖速度和细胞总体损伤状况 为切入点，寻求白藜芦醇对转染TDP．43的NSC34细胞的保护浓度。目的：探索稳定转染TDP．43的NSC34细胞系的培养方法；利用稳 定转染TDP．43 Q331K和TDP．43 M337V的NSC34细胞系作为ALS的细 胞模型，以此模型为基础，研究白藜芦醇干预后细胞的变化，探讨白藜芦 醇对转染TDP-43的NSC34细胞的保护浓度。方法：参照NSC34细胞细胞株的培养程序，将本实验室现有的稳定 转染TDP．43的NSC34细胞系进行复苏、传代、消化、冻存等，观察其 生长和增殖变化。在成功培养稳定转染TDP．43的NSC34细胞基础上， 于传代24小时后进行换液