百草枯致帕金森病的作用及其可能机制的实验分析-experimental analysis of the effect of paraquat on parkinsons disease and its possible mechanism.docx

博士研究生毕业论文中文摘要百草枯致帕金森病的作用及其可能机制的实验研究r甲又捅要／f帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)的病理学特征是中脑的多巴胺能神经元减少或丧失，残留的病变神经元中出现Lewy小体。多巴胺能神经元丧失的确切原因目前仍不十分清楚。由于遗传因素在散发性、特发性PD的发病中缺乏令人信服的证据，所以，环境因素被认为可能是特发性PD的病因之一。众多研究发现除草剂的暴露可显著增加罹患PD的风险。除草剂一百草井g(paraquat，PQ)的结构与多巴胺能神经毒物MPTP相似，因而被认为可能是PD的致病因素。如果百草枯确是PD的病因之一，则全身性暴露于该毒物时可产生黑质纹状体系统中多巴胺能神经元丧失，纹状体中多巴胺及其代谢产物的含量降低，并产生行为障碍。为证实这些观点，我们给新生或成年C57b№小鼠口服一定剂量的百草枯，观察其自发性活动的变化；并通过酪氨酸羟化酶(tyrosmhydroxylase，m免疫组化染色半定量分析了黑质部多巴胺能神经元数量和纹状体中TH免疫活性的改变；采用HPLC．电化学检测了纹状体中多巴胺(dopamine，DA)、高香草酸(homovanillicacid,HVA)、5-羟色胺(semto血，5-HT)、5．羟基吲哚乙酸(5-hydroxyindoleaceticacid，5-}ⅡAA)、去甲。g-上腺素(norepinephrine，NAy舍量。结果表明百草枯与MPTP相似，也可导致小鼠黑质部DA神经元数量下降；纹状体中DA能神经纤维免疫活性g-4氐；自发性活动减少；纹状体中DA及HVA的含量降1氐。提示新生鼠或成年鼠暴露于百草枯可吸收到体内，并透：过血脑屏障，损害黑质纹状体系统，产生类似于MPTP所致的症状。扩为探讨百草枯引起黑质纹状体系统损害的机制，我们研究了百草枯对小鼠脑内线粒体电子传导系统的影响，测定了亚慢性暴露于百草枯的小鼠脑内线粒体呼吸链中酶复合物I、II、IV及柠檬酸合成酶的活性。f结果显示百草枯和MPTP干预组小鼠黑质部及纹状体中酶复合物I均活性显著降低，而额叶和小脑中该酶的活性无变化。另外，各组小鼠黑质部、纹状体、额叶及小脑中酶复合物II、IV及柠檬酸合成酶的活性均无显著差异，提示百草枯透过血脑屏障后可选择性导致黑质部和纹状体中线粒体功能障碍，损害黑质多巴胺能神经元。近年来，大量的证据表明PD的发病与细胞凋亡有关。百草枯和MPP+在体外实验中可诱导PCI2细胞和sH-sY5Y细胞产生凋亡。本研究中我们采用TUNEL染色和TH免疫组化双重染色以及流式细胞仪检测了小鼠暴露于百草枯不同时间时脑内黑质部凋亡细胞数量的变化，并用电镜证实了凋亡细胞的存在。发现小鼠暴露于百草枯2博士研究生毕业论文中文摘要周时，黑质部DA神经元凋亡数量开始增加，暴露1个月时凋亡的DA神经元最多，暴露2个月时凋亡的DA神经元数量有所减少但仍高于对照组。这表明百草枯可在体内诱导小鼠黑质部DA神经元产生凋亡，因而可能是导致PD的神经毒物之一。细胞凋亡是一个系统性的、受细胞内信号传导系统调控的主动死亡过程。细胞凋亡的发生必需有半胱氨酸蛋白酶家族(caSpases)的参与。Caspases通常以无活性的前体存在与细胞中，可为多种因素所激活。研究发现在caspase家族中caspase．3与神经元的凋亡相关。本研究中，我们采用RT-PCR检测了在小鼠暴露于百草枯不同时间时黑质邵DA神经元中caspase．3mRNA表达的变化，并测定了相应时段caspase．3酶的活性。结果发现caspase．3mRNA的表达量在暴露于百草枯2周时开始增加，1个月时最高，2个月时轻度下降，但仍高于对照组。与caspase．3mRNA表达的变化相一致，相应时段的caspase．3的活性也增高，分别为对照组的2．57倍、4．85倍、2．95倍。黑质部DA神经元的凋亡数量与caspase一3mRNA的表达量及caspase．3酶的活性呈显著的正相关，提示caspase．3的激活参与了百草枯诱导的DA神经元的凋亡。、厂／+结论1．新生或成年C57bl／6小鼠经口服途径暴露于百草枯后，百草枯可被机体吸收并透过血脑屏障，导致黑质部和纹状体中线粒体功能功能障碍，选择}生损害黑质纹状体中DA神经元，产生类似于MPTP所致的PD动物模型。2．百草桔可激活小鼠黑质部DA神经元中caspase一3，诱导DA神经元发生凋亡。因此，本研究提示百草枯可能是PD的病因之一。关键词：百草枯帕金森病发病机制小鼠黑质纹状体多巴胺能神经系统中图分类号：R742博士研究生毕业论文AbstractExperimentalstudiesontheeffectandmechanismofparaquatinducingParkinson’sdiseaseAbst