雌激素对颏舌肌功能的影响及其相关作用机制的分析-effects of estrogen on genioglossus function and analysis of its related mechanisms.docx

第四军医大学博士学位论文第四军医大学博士学位论文2 方法 563 结果 574 讨论 585 小结 60第三部分 雌激素对颏舌肌功能影响的分子机制 61实验一 雌激素对颏舌肌成肌细胞内钙离子的影响 61 1 材料 612 方法 623 结果 644 讨论 695 小结 72实验二 雌激素对颏舌肌肌球蛋白重链 MRNA 表达的影响 731 材料 732 方法 743 结果 774 讨论 835 小结 85全文总结 86参考文献 87个人简历和研究成果………………………………………………………….103 致 谢……………………………………………………………………….105-- 缩略语表缩略词 英文全称 中文全称CPM Count per minute 每分钟闪烁计数值DEPC Diethylpyrocarbonate 焦磷酸二乙酯 DMEM Dulbecco’s modified Eagle’s medium 改良的 Eagle 培养基 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜E Estrogen 雌激素E2 Estradiol 雌二醇ER Estrogen receptor 雌激素受体ERE Estrogen response element 雌激素应答元件FBS Fetal bovine serum 胎牛血清HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶HRT Hormonal replacement therapy 激素替代疗法LCSM Laser confocal scanning microscope 激光共聚焦扫描显微镜MHC Myosin heavy chain 肌球蛋白重链MLC Myosin light chain 肌球蛋白轻链NCPAP Nasal continuous positive airway pressure ventilationOSAHS Obstructive sleep apnea hyponea syndrome经鼻持续正压通气 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征OVX Ovariotomy 卵巢切除术缩略词英文全称中文全称PBS PCR RTUADMPhosphate-buffered saline Polymerase chain reaction Reverse transcriptionUpper airway dilator muscle磷酸盐缓冲液 聚合酶链反应 反转录上气道扩张肌雌激素对颏舌肌功能的影响及其相关作用机制的研究博 士 研 究 生：郭 涛导 师：丁 寅 教授 第四军医大学口腔医院正畸科，西安 71003中文摘要目的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（Obstructive sleep apnea hyponea syndrome, OSAHS）是以睡眠期间上气道发生反复阻塞为特征的呼吸紊乱现 象。由于睡眠期间通气不足，血氧浓度降低，患者易出现嗜睡、头昏、焦 虑、抑郁，进而出现高血压、脑血栓等心脑血管疾病，最终可导致患者死 亡。OSAHS 的发病机理主要可以归结为上气道解剖性狭窄与上气道扩张肌 功能异常两个方面。流行病学调查研究显示，OSAHS 男性的发病率明显高 于女性，男、女之间的比例约为 2-3:1。然而，临床研究表明，女性绝经后 OSAHS 发病率显著上升，但在使用雌激素替代治疗后其发病率降低，同时， 颏舌肌的肌电活性也明显增强。这些研究结果提示雌激素对 OSAHS 的发病 起到了重要的保护作用，但具体机制尚不明确。因此，本课题拟在以往研 究的基础上，通过建立不同雌激素水平的动物模型和颏舌肌原代培养细胞 模型，从体内和体外两方面研究雌激素对颏舌肌生物学功能的影响并探讨 可能的分子机制。从而为 OSAHS 的临床预防和治疗提供理论依据。方法(1) 采用卵巢切除与雌激素替代法建立不同雌激素水平的动物模型，通过颏 舌肌电生理检测观察雌激素对颏舌肌功能的影响，并采用免疫组织化学 方法检测大鼠颏舌肌雌激素受体的表达。(2) 通过机械分离加酶消化法进行大鼠颏舌肌原代培养，采用差速贴壁法纯 化细胞，并使用免疫荧光方法对培养细胞进行鉴定。(3) 采用细胞免疫荧光方法鉴定雌激素受体 α（ER-α）与 β（ER-β）在颏舌 肌成肌细胞上的表达与分布。(4) 使用激光共聚焦显微镜动态观测雌激素对颏舌肌成肌细胞 Ca2+转运的 影响。(5) 通过实时定量 RT-PCR 检测雌激素对颏舌肌成肌细胞肌球蛋白重链各 亚型 mRNA 表达的影响。结果(1) 雌激素对大鼠颏舌肌功能存在显著影响，随血清雌激素水平的升高，颏 舌肌肌电活性增强。(2) 免疫组化染色结果显示 ER-α 与 ER-β 在大鼠颏舌肌组织中呈弱阳性表