中华石蝴蝶组培养及试管开花诱导.docVIP

中华石蝴蝶组织培养及试管开花诱导 　　摘要：以中华石蝴蝶（Petrocosmea sinensis Oliv.）的幼嫩叶片为外植体，以MS为基本培养基，研究植物生长调节剂多因素组合对中华石蝴蝶继代增殖和生根培养的影响，并诱导获得的无菌苗在试管中开花。结果显示，不同的生长调节剂配比对中华石蝴蝶继代培养和生根培养的影响不同，MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L IAA利于芽继代增殖，MS+0.5 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭适于诱导生根获得再生植株，MS+0.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA利于试管苗开花，持续继代可抑制中华石蝴蝶的试管开花。 中国论文网 /1/viewhtm　　关键词：中华石蝴蝶；组织培养；继代增殖；生根培养；试管开花 　　中图分类号： S682.1+90.4+3文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）12-0098-03 　　中华石蝴蝶（Petrocosmea sinensis Oliv.）为苦苣苔科石蝴蝶属多年生草本植物，产于云南北部、四川和湖北西部，生于低山?处的石上。目前，苦苣苔科（Gesneriaceae）植物在全世界约有140属2 000余种，中国有58属（其中28属特产中国）463种，从辽宁到海南均有分布，多数属、种分布于云南、广西、广东等省（区）热带及亚热带石灰岩的陡崖上[1]。苦苣苔植物很多品种花色艳丽，极具观赏价值。此外，芒毛苣苔属、非洲紫苣苔属、大岩桐属，中国产的吊石苣苔、蚂蟥七、牛耳朵等具有药用价值[2]。由于许多苦苣苔科植物分布区域狭窄，对生长条件要求苛刻，加上民间的过度采挖，使许多苦苣苔科植物的野生资源濒临绝种[3]。 　　中华石蝴蝶不仅花色美丽，可作为观赏花卉，同时也是一种中药材，以全草入药，具有清热解表、健脾和胃等功效，可用于治疗感冒、小儿疳积等症状[4]。本研究通过对中华石蝴蝶组织培养的技术研究，探索行之有效的中华石蝴蝶繁殖技术并通过仿生栽培，可以对其野生资源进行有效保护。试管开花是利用组织培养技术使组培植物在离体环境下开花的一种现象，不受季节的限制，可以通过控制相应的条件，让组培植物进入开花时期[5]。中华石蝴蝶的试管开花可为人们对鲜花日益增长的需求提供广阔的市场。因此，利用植物组织培养技术对中华石蝴蝶进行培养并对其试管开花作初步探究，研究其开花机制，具有重要的现实意义和应用价值。本研究在中华石蝴蝶组织培养的基础上，进行无菌苗的试管开花诱导，可为研究其花期生理和调控提供基础资料。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　中华石蝴蝶采取广西壮族自治区药用植物园科研基地内健壮无病害的植株，选取其幼嫩的叶片为外植体。 　　1.2外植体消毒 　　将采回的外植体在流水下缓慢冲洗，并用软毛刷轻轻擦拭去除表面的污垢，放入烧杯中，用适量浓度洗洁精溶液浸泡15 min后，再用流水冲洗10 min。将材料移至超净工作台上，用75%乙醇表面消毒15 s后用无菌水冲洗2次，再用0.1%氯化汞溶液浸泡8 min，最后用无菌水浸泡冲洗5次，将氯化汞溶液彻底洗出。在无菌器皿中将外植体与消毒液接触的伤口切除，接种于诱导培养基中，以诱导出的丛生芽作为试验材料。 　　1.3继代增殖 　　取无菌中华石蝴蝶丛生芽，接入添加不同浓度植物生长调节剂6-BA、NAA、IAA的MS+30 g/L蔗糖+4.0 g/L琼脂的培养基中，调节培养基的pH值为5.8，设置其培养条件为平均光照度1 500～2 200 lx，光照时间12 d/h，培养温度（25±3） ℃，考察不同培养配方对中华石蝴蝶继代的影响。 　　1.4生根培养 　　挑取继代培养得到的增殖苗，单切丛生芽为单芽，接入添加不同浓度的植物生长调节剂6-BA、NAA的MS+蔗糖 30 g/L+琼脂4.0 g/L培养基中，另一部分接入添加1 mg/L活性炭的上述培养基中生根，设置其平均培养条件为光照度1 500～2 200 lx，光照时间12 d/h，培养温度（25±3） ℃，考察不同培养基配方对中华石蝴蝶生根率的影响。 　　1.5植物生长调节剂对中华石蝴蝶诱导开花的影响 　　选取继代增殖的无菌苗，接种到MS培养基以及添加6-BA、NAA的MS培养基上，每种培养基中含有30 g/L蔗糖、4.0 g/L 琼脂，培养条件为平均光照度1 500～2 200 lx，光照时间12 d/h，培养温度（25±3） ℃，在培养期间观察植物的生长情况并记录试验结果。 　　1.6继代培养对中华石蝴蝶试管开花的影响 　　设计1组继代试验，中华石蝴蝶试管苗每40 d转接至继代培养基中继代培养1次，比较连续继代、只继代1次对中华石蝴蝶试管开花的影响。 　　2结果与分析