氢盐水对卒中后抑郁小鼠的治疗作用和机制分析-therapeutic effect and mechanism analysis of hydrogen saline on post-stroke depression mice.docx

氢盐水对卒中后抑郁小鼠的治疗作用和机制研究 氢盐水对卒中后抑郁小鼠的治疗作用和机制研究 第二军医大学博士学位论文 第二军医大学博士学位论文 - - PAGE 1 - - - PAGE 10 - 摘 要 背景 卒中后抑郁(post-stroke depression, PSD)是卒中最常见的并发症之一,发病率为 30%-50%。PSD 属于神经和精神系统的学科交叉地带，对其认识不足,危害性被忽视 和低估。PSD 的病因目前尚不十分清楚。近年研究认为脑缺血引起的神经元损伤可能 并非 PSD 的病因，而髓鞘损伤与抑郁的关系越来越受重视。Rajkowska 等提出，情绪 障碍的病理特点是胶质病变。组织病理学结果显示重性抑郁障碍、躁狂发作的患者前 额叶脑区神经胶质细胞数量或密度降低。 传统观点认为脑缺血后最易导致神经元损伤，近年研究表明少突胶质细胞缺血耐 受性并不比神经元好，甚至短暂性脑缺血即可引起少突胶质细胞的损伤。少突胶质细 胞的损伤与缺氧引起的氧化应激、兴奋性毒性等有关。 氢是自然界的基本元素，氢气是无色、无味，而且具有一定还原性的双原子气体。 呼吸一定浓度的氢可治疗脑缺血再灌注损伤。2007年7月，日本医科大学Ohsawa在《自 然医学》报道，动物呼吸2%的氢气就可有效清除自由基，显著改善脑缺血再灌注损 伤。此后国内外多个试验证实注射饱和氢气盐水对新生小鼠脑缺血缺氧损伤，对心肌、 肾、小肠缺血再灌注损伤均有明显的治疗作用。目前认为，氢气治疗缺血再灌注损伤 的基础是选择性中和羟自由基和亚硝酸阴离子，从而起到抗氧化作用。 目的 本课题首次将氢盐水用于缺血再灌卒中后抑郁小鼠模型。探讨氢盐水对以胶质损 伤为重要背景的卒中后抑郁有无治疗作用；氢盐水对胶质损伤有无保护作用及其可能 的机制。胶质损伤的修复在卒中后抑郁改善过程中是否起到作用，氢盐水对这一过程 有无影响。 第一部分 卒中后抑郁小鼠模型的建立 方法：我们采用实验室常用的双侧颈总动脉完全阻断1小时后再灌注，结合行为 应激1周的方法造模。 结果： 缺血再灌注组悬尾静止不动时间在术后第3天即高于假手术组，强迫游泳静止不 动时间在术后第7天即高于假手术组，并呈时间依赖性递增。至第14天悬尾静止不动 时间135.4±27.8秒，高于假手术组63.6±13.9秒，有统计学意义（P0.001）。缺血再灌 注组强迫游泳静止不动时间在术后第7天即高于假手术组，并呈时间依赖性递增，至 第14天强迫游泳静止不动时间86.6±13.7秒，高于假手术组64.2±9.6秒，有统计学意义 （P0.05）。病理学也提示：术后14天，缺血再灌注组Nissl染色10倍物镜下海马Hilus 区细胞数为32±2.5个；少于假手术组的49±3.2个，有统计学意义（P0.001）。 结论：本模型稳定，重复性好。 第二部分 氢盐水对缺血再灌卒中后抑郁小鼠的治疗作用 方法 1、动物分组：①假手术组（不阻断血流，其余同对照组）②氢盐水干预 3 天组 (8 ml/kg, i.p.，1/日)③氢盐水干预 7 天组④氢盐水干预 14 天组⑤生理盐水对照组（将 干预改为生理盐水）。每组共 32 只，总数 160 只。在术后第 7、14、21、28 天 4 个 时间点测行为学指标及取血液、脑组织标本，每次每组 8 只。 2、行为学检测：悬尾实验、强迫游泳实验均持续 6 分钟，记后 4 分钟内静止不 动时间；定位航行实验测量 90 秒时程内上台潜伏期、目标象限活动时间百分比；自 发活动实验测量 3 分钟时程内小鼠在畅箱中休息时间及活动路程。 3、病理学：常规 HE 染色，尼氏染色并计数海马 Hilus 区细胞。 结果 氢盐水各组对改善缺血再灌卒中后抑郁小鼠悬尾静止不动时间有明确的作用。对 于术后的定位航行实验上台潜伏期的缩短和自发活动中休息时间的缩短均有作用。其 趋势也较生理盐水组明显。而对于强迫游泳静止不动时间，氢盐水干预组与生理盐水 对照组相比无组间差别。对于自发活动总路程和中央路程也无明显改变。 氢水14天组的Hilus区的术后21天神经元细胞数量为42.5±3.1个，比生理盐水对照 组32.5±3.1个多，有统计学意义（F=25.548，P=0.001）。其他两个氢盐水组与对照 组无差别。证实氢水干预14天具有神经保护作用。从另一方面也反证了卒中后抑郁的 产生与卒中之后的环境应激有关，具有一定的时间依赖性。可能稍长时间的神经保护 措施仍是必要的。 结论 1、氢盐水各组可改善缺血再灌卒中后抑郁小鼠的行为学指标。 2、病理证实氢盐水干预 14 天具有神经保护作用。 第三部分 氢盐水对缺血再灌卒中后抑郁小鼠的治疗作用机制探讨 方法： 1、脑组织自由基含量检测：购买南京建成公司试剂盒测羟自由基及氧化应激反 应下游产物丙二醛。 2、免疫组化