酶分析法课件.pptVIP

酶 分 析 法;教学目的和要求 ;概 述;酶是由活细胞产生的具有催化作用的特殊物质，又称生物催化剂。 除极个别RNA为催化自身反应的酶外，其余所有的酶都是蛋白质。 生物体内一切生化反应都需要酶的催化才能进行！ 性能远远超过人造催化剂。 产物（product，P） 底物（substrate，S ）;酶是特殊的催化剂 (1) 生物大分子 (2) 催化条件温和 (3) 强酸、碱或高温下失活 (3) 高选择性 (4) 高催化效率 机理：降低反应活化能，提高反应速度，不改 变平衡点。 只起催化作用，本身不消耗。;概 述;4.两类酶分析法的区别;酶法分析的优点;共同点：原理和方法相同，以酶的专一高效催化某化学反应为基础，通过测定酶反应的速率或生成物浓度来检测相应物质的含量。; 酶法测定的原则;酶反应动力学;2、Km米氏常数意义及推导过程;计算题;第一节 酶活力测定法;一、基本概念;酶活力(enzyme activity)的测定 ;;引起酶促反应速率降低的原因;检验酶反应和测定系统是否适宜的标准;一、基本概念;一、基本概念;一、基本概念;国际酶活力单位;酶的比活力(specific activity);活力单位(U)与比活力;酶促反应速度的测定方法;酶活力测定实例; ; 作 业;二、酶促反应的条件;确定反应条件时应考虑：;;pH对酶反应的影响; pH影响酶活力的原因 ;二、酶促反应的条件;最适温度;温度对酶反应的影响;;三、酶活力的测定方法;（一）取样测定法;取样测定法;取样测定法;;; （二）连续测定法;连续测定法;酶活不能反映酶的使用效果 只能用于产品质量的控制;测定过程中应注意的问题;酶反应进程曲线;生化药物制剂检验程序;酶分析法的检测方法;最常用的方法介绍如下： (1) 紫外-可见分光光度法 (2) 荧光分析法 (3) 旋光度法 (4) 酶偶联测定法 (5) 其他检测法;一、紫外-可见分光光度法;还原;;酶偶联测定法：是应用过量、高度专一的 “偶联工具酶”使被测酶反应能连续进行到某一可直接、连续、简便、准确测定阶段的方法。;被测反应;二、荧光分析法;华勃氏微量呼吸仪（瓦氏呼吸仪） ;五 电化学法（electrochemical）;第二节 酶法分析;一、原理; ;一、终点测定法;（一）终点法条件 ;;;反应产物抑制;（二）终点法种类;（二）终点法种类;1. 羟基丙酮酸的定量测定;;2、和指示酶反应偶联的定量法;D-2-磷酸甘油酸;;二、反应速度法;特 点 ：;具体测定方法;（一）利用作底物的测定法;甘油三酯;（二）利用辅酶或抑制剂作用的测定方法;;（三）特殊的反应速度测定法 ;乙酰磷酸+CoA-SH;作 业