miR34a对人成骨肉瘤MG63细胞生长增殖影响.docVIP

miR34a对人成骨肉瘤MG63细胞生长增殖影响 　　[摘要] 目的 探讨miR-34a对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响。 方法 运用miR-34a的mimics或inhibitors分别转染人成骨肉瘤MG-63细胞，分别为实验组，脂质体2000为对照组，采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖情况。 结果 对照组吸光度值在24 h、48 h和72 h分别为（0.33±0.02）、（0.55±0.03）、（0.75±0.06）；miR-34a mimics可抑制MG-63细胞增殖，其吸光度值分别降至（0.21±0.02）、（0.26±0.03）、（0.31±0.04），经统计学分析，差异有统计学意义（P 0.01）；miR-34a inhibitors可使人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活性增强，其吸光度值分别增加到（0.41±0.05）、（0.71±0.08）、（0.94±0.08），经统计学分析差异有统计学意义（P 0.01）。 结论 miR-34a可使人成骨肉瘤细胞的增殖活性下调，其在骨肉瘤的发生发展中可能发挥一个抑瘤基因的作用。 　　[关键词] miR-34a；人骨肉瘤；细胞生长 　　[中图分类号] R738.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）21-0023-02 　　众所周知，miRNA成为分子生物学研究热点，人类miRNA充当癌基因或抑癌基因的作用调控其靶基因的表达及相关信号通路，在肿瘤的发生、发展和转归过程中发挥重要作用[1，2]。miRNA参与个体发育、造血、脂肪代谢、器官生成以及细胞的增殖、分化、凋亡等活动，绝大多数癌基因或抑癌基因受到miRNAs分子的调控[3-6]。本文采用MTT技术探讨miR-34a在骨肉瘤中生物学功能和分子机制，为进一步阐明成骨肉瘤发生发展的分子机制提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 细胞株 人成骨肉瘤MG-63细胞购自上海细胞生物学研究所。 　　1.1.2 试剂 MTT为Sigma产品，购自北京鼎国生物技术有限公司；miR-34a mimics与inhibitors购自上海吉玛生物技术有限公司；脂质体Lipo2000购自Invitrogen公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 细胞培养 MG-63细胞用DMEM培养基常规培养，取对数生长期细胞用于实验。 　　1.2.2 MTT比色法 为检测miR-34a对MG-63细胞生长增殖的影响，设计好实验组与对照组，每组设计重复孔3个，分别在转染各时间点后每孔加入配置好的MTT溶液20 μL，37℃培养4 h后倒掉培养基，每孔加150 μL二甲亚砜，静置或轻摇10 min，然后检测各孔的吸光度值。 　　1.2.3细胞转染 消化传代待细胞增长到70%～80%左右。准备好2.5 μL的脂质体Lipo2000与100 μL无血清MEM培养基充分混匀，然后静置15～20 min，分别用PBS与无血清MEM培养基洗涤细胞；一起加入96孔板中，然后按说明书操作。 　　1.3 统计学处理 　　所有数据均由SPSS 13.0软件进行处理，两组间比较采用t检验，P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 miR-34a inhibitors对人成骨肉瘤细胞MG-63生长增殖的影响 　　人成骨肉瘤MG-63细胞经miR-34a inhibitors处理后，细胞生长明显比未处理细胞的生长迅速；处理1 d、2 d、3 d后经MTT检测其吸光值，对照组分别为（0.33±0.02）、（0.55±0.03）、（0.75±0.06），处理组分别为（0.41±0.05）、（0.71±0.08）、（0.94±0.08），miR-34a inhibitors处理后均显著上调，两组比较差异有统计学意义（t=12.38，P 0.01）。提示干扰miR-34a可促进人成骨肉瘤细胞MG-63生长增殖的作用。 　　2.2 miR-34a mimics对人成骨肉瘤细胞MG-63生长增殖的影响 　　MG-63细胞经miR-34a mimics处理后，MG-63细胞生长明显比未处理细胞的生长减缓；处理1 d、2 d、3 d后经MTT检测其吸光值，对照组分别为（0.33±0.02）、（0.55±0.03）、（0.75±0.06），处理组分别为（0.21±0.02）、（0.26±0.03）、（0.31±0.04），处理后均显著下调，二组比较差异有统计学意义（t = 9.69，P 0.01）。提示过表达miR-34a可抑制人成骨肉瘤细胞MG-63生长增殖的作用。 　　3 讨论 　　骨肉瘤是最常见的恶性骨原发肿瘤，发病率约为1/1 000 000～1/1