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P16在脑血管畸形中表达及其意义 　　【摘要】 目的：探讨P16基因在脑血管畸形（CVM）及正常脑组织中的表达情况，讨论其临床病理意义。方法：收集脑血管畸形标本，利用免疫组化方法测定P16蛋白在正常脑组织及脑血管畸形中的表达情况。结果：在脑血管畸形标本及正常脑组织标本中P16蛋白阳性表达率分别为32.1%（18/56）及7.4%（2/27），两者比较差异有统计学意义（P0.05）；P16蛋白在海绵状血管瘤中的表达率高于动静脉畸形中的表达，两者比较差异有统计学意义（P0.05）。结论：P16基因在脑血管畸形（CVM）的发生发展中有重要作用。 　　【关键词】 P16； 基因； 脑血管畸形； 免疫组织化学 　　在炎症、肿瘤等情况下，可以引起血管生成（angiogenesis），血管生成生成的过程中有多种因素参与，包括血管内皮生长因子（VEGF）及细胞周期控制蛋白等[1-2]。目前脑血管畸形的形成过程尚不明确，但是血内皮细胞的增殖在脑血管畸形的形成过程中起着重要的作用[3]。 　　笔者应用免疫组化方法检测P16蛋白在脑血管畸形患者标本及正常脑组织中的表达情况，并分析其临床病理意义。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 收集东莞市虎门医院及延大附院病理科1995年1月-2012年12月期间进行手术的脑血管畸形患者标本（56例），男女比例（32：34），平均年龄27.2岁（18～42岁），其中动静脉畸形37例，海绵状血管瘤19例。对照组为27例正常脑组织进行颅内减压的患者，。 　　1.2 实验试剂及免疫组织化学方法 P16单克隆抗体（即用型）及二抗检测试剂盒均购自迈新公司。所有标本取材厚度为3 mm，取材后采用10%中性福尔马林固定，固定时间为12 h，常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，3 μm连续切片，烤片1 h（70 ℃），烤片后采用二甲苯脱蜡，所有切片应用柠檬酸进行高温高压抗原修复处理，加一抗后保湿盒内常温孵育1 h，PBS缓冲液冲洗，二抗常温孵育0.5 h，DAB显色，苏木素复染细胞核，中性树胶封片。每批切片实验均设立明确的阳性对照及阴性对照。 　　1.3 结果判定标准 （1）病理医生在奥林帕斯BX50显微镜下进行评估所有免疫组化玻片。（2）P16蛋白主要表达于血管内皮细胞的细胞核，细胞核出现淡黄色、黄色或棕黄色颗粒为阳性表达。（3）随机选取10个40×10高倍视野，进行观察计数。（4）评估阳性细胞百分率及阳性细胞染色强度。Ⅰ：阳性细胞百分率：75%为4分。Ⅱ：染色强度：不着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分及黄褐色3分。Ⅰ×Ⅱ≥3分为阳性，3分为阴性[4]。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料采用 字2检验和Fisher确切概率法分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　在55例脑血管畸形患者免疫组化切片中P16蛋白的阳性表达为18例（32.1%）高于在27例正常脑组织免疫组化切片中的表达2例（7.4%），表达率比较差异有统计学意义（ 字2=6.09，P=0.014）；在脑血管畸形的患者中P16蛋白在海绵状血管瘤中的表达高于在动静脉畸形中的表达，差异有统计学意义（P0.05），见表1。 　　3 讨论 　　近年来发现一个与P53同样重要的P16抑癌基因，它的突变或缺失参与了多种肿瘤的形成[5-7]。血管内皮细胞的增殖在脑血管畸形的发生发展过程中起着重要的作用[8]。细胞的增殖周期受相关基因及其表达产物的调控，如果细胞周期调控出现异常，细胞的增殖状态也将进入异常。Pl6基因是参与细胞周期调控的基因之一，它是细胞周期的负调控蛋白，可以阻止细胞从G1期进入S期[9]。P16基因通过突变、缺失及甲基化的形式失活，从而丧失对细胞周期调控的作用[10]。P16基因的失活意味着P16的低表达，但是在许多研究中却发现：存在甲基化的P16基因失活，与P16蛋白的表达明显相关，其机制可能增殖失控的细胞反馈性提高P16蛋白的表达[11]。笔者的研究结果与之类似：在56例脑血管畸形患者免疫组化切片中P16蛋白的阳性表达率为32.1%（18/56）高于在27例正常脑组织免疫组化切片中的表达率为7.4%（2/27），差异有统计学意义（P0.05）；同时，在脑血管畸形的患者中P16蛋白在海绵状血管瘤中的表达高于在动静脉畸形中的表达，差异有统计学意义（P0.05）。结果表明：P16基因参与了脑血管畸形的发生发展过程，P16蛋白的表达与血管内皮细胞的增殖正相关，在海绵状血管瘤中的表达率高于动静脉畸形中的表达率，其机制可能是增殖失控的血管内皮细胞负反馈提高了P16蛋白的表达。 　　参考文献 　　[1] Carmeliet P.Angiogenesis in life，d