STMN1蛋白及EPCAM在食管鳞状细胞癌组织中表达及其在食管鳞状细胞癌侵袭和转移中作用.docVIP

STMN1蛋白及EPCAM在食管鳞状细胞癌组织中表达及其在食管鳞状细胞癌侵袭和转移中作用 　　摘要 ：目的： 探究和分析STMN1蛋白及EPCAM在食管鳞状细胞癌组织的表达及其在食管鳞状细胞癌侵袭和转移中的作用。方法： 采用免疫组织化学方法对100例食管鳞状细胞癌中的STMN1蛋白和EPCAM的表达水平，在将STMN1siRNA转染于食管癌细胞后，对转染效果进行检测，观察转染的STMN1siRNA对于癌细胞的侵袭和转移的影响作用，采用同样的方法对癌细胞中EPCAM的表达水平和对于鳞状细胞癌的侵袭和转移的影响作用。结果： 在实验后，结果显示STMN1在食管鳞状细胞癌组织中呈现高表达，而且与淋巴转移有较为显著地相关性。而EPCAM在患者的癌细胞中呈现阳性表达，与淋巴转移无相关性，反而与侵袭的深度有一定的相关性。siRNA干扰STMN1的表达，能够较为明显的抑制癌细胞的侵袭和转移能力。结论： STMN1能够促进食管鳞状细胞癌组织侵袭和转移的发生，EPCAM则在癌细胞中表达阳性与癌细胞的侵袭深度有关。 　　关键词： STMN1；食管鳞状细胞癌；侵袭；转移；EPCAM 　　食管癌是一种较为常见的肿瘤之一，有关文献报道，在世界范围内肿瘤疾病导致的死亡原因中高居第6位[1]。在我国，食管癌也是一种病死率较高的肿瘤疾病，在癌症致死原因中高居第4位[2]。食管癌主要包括食管鳞状细胞癌和食管腺癌。而在我国食管鳞状细胞癌占食管癌病例中的90%，食管鳞状细胞癌主要发生局部或者是远处的侵袭和转移，是导致患者预后不良最为常见的原因之一，而对于其发生的机制目前还没有较为明确的定论。在临床上，对于食管鳞状细胞癌的侵袭和转移的相关分子以及其机制的探究在早期诊断和临床干预等方面具有较为重要的意义和价值。STMN1是一种能够在细胞的有丝分裂期和分裂期改变微管动力学的蛋白质[3]，在很多中癌细胞中表达增加，主要参与了细胞的增殖、细胞运动、微管动力学调节和周期调节等功能[4]。有关报道曾报道过STMN1是一种转移相关的基因，而对于食管鳞状细胞癌组织中STMN1的侵袭和转移相关性则没有太多的阐明。也有人提出食管癌鳞状细胞癌可能是一种干细胞癌[5]。本次研究就是通过对100例食管鳞状细胞癌中STMN1蛋白以及干细胞标志EPCAM的表达水平的检测，并分析在食管鳞状细胞癌的侵袭和转移中的作用和影响。以下是本次研究的具体内容。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　本次接受研究的食管鳞状细胞癌患者入院前均未接受化疗、放疗和其他的治疗。患者中男性患者66例，女性患者34例，年龄在39-80岁之间，平均年龄为（58.2±1.3）岁；按肿瘤的分化程度分类：高分化52例，中分化36例，低分化或未分化12例；这100例患者中有淋巴结转移者56例，无淋巴结转移者44例，详见表1。 　　表1.患者的一般资料的数据[n] 　　1.2方法 　　1.2.1siRNA转染实验 　　主要是按照LipofectamineTM2000说明书中所表示的[6]，进行瞬时转染步骤，转染6小时后对培养液进行更换，72小时后收取细胞进行相应的实验。 　　1.2.2细胞的侵袭和转移实验 　　（1）采用Matrigel1：8进行稀释，包被Millicell小室的底部摸的上室面，将其置于37℃的温度环境下30min，使之凝结成凝胶。（2）消化细胞，在消化终止后，进行离心处理除去培养液，再用适量的无血清培养基进行重悬。（3）取细胞悬浮液100μL加入到Millicell小室上层，而在小室的下层加入500μL培养液，培养时间为48小时。（4）最后对结果进行统计，在200倍的显微镜下选取5个视野观察细胞进行计数。 　　1.2.3免疫组化的方法 　　首先，将组织芯片进行常规的脱蜡直至水化；再放入柠檬酸盐抗原修复液中进行高压修复2分钟，待自然冷却后进行PBS液洗；再以3%的过氧化氢温室孵育15分钟，而后同样采用PBS液洗；而后滴加山羊血清，再用PBS液洗；再将DAB底物工作液滴加于切片之上，在显微镜下控制显色，随后使用自来水终止显色；使用苏木素进行复染；采用常规乙醇进行脱水。 　　1.3统计学方法 　　本次研究所得数据采用SPSS16.0软件进行处理，对比检验方法采用X2检验，若P0.05则说明差异较为明显，具有一定的统计学意义，反之，则表示无统计学意义。 　　1.4表达效果的判定标准 　　（1）主要是按照细胞着色情况进行分类，细胞无显色为0分，浅黄色为1分，棕黄色2分，棕褐色为3分；而后再按照阳性细胞百分比进行评分，小于30%为1分，30%-70%为2分，大于70%为3分。取两次判定评分的乘积作为总积分，0-1分为阴性（-），2-3分为弱阳性（+），4-6分为阳性（++），7分以上为强阳