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ZX―1对稻瘟病病菌侵染循环影响 　　摘 要：ZX-1是南开大学元素有机国家重点实验室范志金课题组发现的高活性三唑并噻二唑化合物，在前期研究表明，ZX-1对水稻稻瘟病有一定的抑制作用，为了进一步探索ZX-1的生物活性，通过ZX-1对水稻稻瘟病侵染过程的几个阶段作用，评估其作为农药的可能性。 　　关键词：ZX-1；水稻稻瘟病 　　水稻稻瘟病由病原真菌引起，是危害水稻最严重的病害之一，该病分布广泛，发病时传播速度特别快，属于世界性难题。稻瘟病菌以两种形态存在：1.病原菌丝体寄宿在水稻体内，吸收寄住养分，造成水稻染病；2.病原菌分生孢子在适宜的条件下萌发并在水稻表面繁殖，造成水稻叶面间的传播。 　　水稻稻瘟病病原菌的侵染过程主要分为6步：1.病菌孢子寄宿在寄主表面；2.病菌芽管伸长；3.孢子开始萌发；4.附着胞开始形成；5.附着胞侵入；6.在寄主内菌丝开始繁殖。 　　图1 水稻稻瘟病的侵染过程 　　本试验正是从这6个步骤进行研究，选用噻酰菌胺、苯并噻二唑、阿米西达三种药剂为参照，对南开大学范志金课题组研发的三唑并噻二唑化合物（ZX-1），进行活性检测。 　　一、材料与方法 　　1.供试药剂 　　ZX-1：南开大学范志金教授课题组合成； 　　噻酰菌胺：6% 水分散剂，日本农药株式会社生产； 　　苯并噻二唑：50%颗粒剂，先正达公司生产； 　　阿米西达：25%悬浮剂， 先正达公司生产。 　　2.供试病原菌 　　水稻稻瘟病菌（Phyriculariaoryzae）。 　　3.实验器材 　　Nikon Eclipse E600W显微镜； 　　Diagnostic Spot V4.0 Insight Software软件。 　　4.试验方法 　　（1）在ZX-1的作用下，稻瘟病病菌菌丝生长和菌丝形态的变化。通过采用生长速率法，将预先培养好的水稻稻瘟病病菌，接种于含有噻酰菌胺、苯并噻二唑、阿米西达以及ZX-1的AEA培养基平板上，设5个重复，同时制作5个AEA培养基作为空白对照。在26 ℃的培养箱内培养5-7天，通过测量各个AEA培养皿的菌落直径（mm），计算噻酰菌胺、苯并噻二唑、阿米西达及ZX-1对稻瘟病菌的生长抑制率，并转换成抑制机率值。 　　AEA培养基制作：酵母浸膏5g、甘油20mL、MgSO40.25g、NANO37g、KCL 0.6g、KH2PO41g、琼脂22g、去离子水1L。 　　将配好浓度的待测药剂制成AEA培养基平板，将已经培养7-10天的稻瘟病病原菌接种于含药AEA平板上，在26℃的培养箱中生长3-5天。随后将培养的含药病原菌菌落沿边缘取下，制成玻璃切片放于显微镜下观察病原菌菌丝的生长形态，并用Spot软件进行拍照记录。 　　（2）ZX-1对孢子萌发的抑制作用。将病菌接种在空白的AEA培养基上，再放入26℃的培养箱中培养7-10天。将培养好的培养基放入已灭菌超净工作台进行操作，用已灭菌的毛笔配合无菌水刷下AEA培养基中的稻瘟病病菌孢子，将孢子悬浮液过滤后使用血球计数板计数，调节病菌孢子浓度至5×105个/mL，同时取10mL菌液加入150mL的AEA培养基中进行培养。培养7天后，将AEA培养基上培养的稻瘟病孢子在超净工作台上进行洗刷、过滤并配制成各种浓度的病原菌孢子悬浮液供试验使用。 　　将各待测药品配制成100μg/mL的药液，并将成熟度相对一样的稻瘟病孢子配制成浓度为2×105个/mL的孢子液。将5mL药液与5mL孢子液混合后配制成50μg/mL的混合液，再取混合液滴于凹槽玻璃片上，在26℃温度条件下保湿培养10-12小时，设置3-5个重复，大约12小时后使用显微镜观察病原菌孢子的生长萌发情况。 　　（3）ZX-1对芽管伸长的影响。将成熟度一致的稻瘟病孢子配制成浓度为2×105个/mL的孢子液，在24孔板上每孔滴加0.2mL孢子液，在26℃的培养箱里保湿培养5小时后每孔再加入0.1mL什么浓度的药液，混匀后取0.1mL于凹槽玻璃片上，在26℃培养箱下继续保湿培养5小时，观察病原菌芽管的伸长情况。 　　（4）ZX-1对附着胞形成及其侵入的影响。制作琼脂膜，将琼脂膜切成2×2cm的正方形小块，再将切成小块后的琼脂膜放在载玻片上，然后将洋葱表皮也切成2×2cm的正方形小块并放在琼脂膜上，在放洋葱表皮的过程中，注意排出气泡。随后将已配制好的稻瘟病病原菌孢子液滴到洋葱上。在26℃的培养箱中培养5个小时，然后用吸水纸吸干周围的水滴，在同样的位置滴入50μl什么浓度的待测药液。将待测物整理后，继续放入26℃的培养箱进行培养，5个小时后，观察载玻片上病原菌孢子附着胞的生长情况。将剩余的待测物滴入各个实验药剂后继续培养15小时后，再次观察孢子附着胞的侵入状况。 　　（5）在ZX-1对