HPLC测定方法在半枝莲野黄芩苷含量检测中应用分析.docVIP

HPLC测定方法在半枝莲野黄芩苷含量检测中应用分析 　　摘 要：半枝莲是一种具有散瘀止血、清热解毒等功效的中药材，在各种肝炎、蛇咬伤或者癌症等疾病治疗中具有显著疗效。由于不同采收时节对植物生长及药效成分含量会产生一定影响，而且半枝莲不同部位的野黄芩苷含量也存在一定差异性，为了准确掌握半枝莲最佳采收时期及最好药用部位，本文研究中将采用HPLC检测法对云南省墨江产的半枝莲进行野黄芩苷成分检测。 　　关键词：半枝莲；野黄芩苷；HPLC检测 　　中药半枝莲（Herba scutellariae barbatae）属于是一种唇形科（Labiatae）植物。中医学理论证实，半枝莲具有味苦、辛，性寒，可用于治疗肝脏、肺、肾脏相关疾病治疗，可发挥良好的化瘀利尿、清热解毒药效[1]。现代药理学研究显示，半枝莲药物可在抗病原菌、肿瘤因子。细菌及保护肝脏功能、解热等方面表现出良好的活性特征。相关学者研究[2]发现，半枝莲药物中主要的药效成分为野黄芩苷，而药材中的野黄芩苷含量直接影响药物临床疗效，因此掌握半枝莲药材中野黄芩苷含量，对半枝莲药材开发及高效利用具有重要意义。 　　1 实验材料 　　本文研究中使用的半枝莲药物均产自于云南墨江，选取的研究样本采收时间分别为2014年6月10日、7月10日、8月10日三个时间点，药材经干燥处理后选取不同药用部位（花、叶、茎、根、全草）进行分类处理、待检；所有半枝莲药材均由云南农业大学热带作物学院专家鉴定为唇形科植物半枝莲。 　　2 仪器与试剂 　　本文含量检测仪器均由云南农业大学热带作物学院提供，主要仪器：SP8800 高效液相色谱仪、SP2000紫外检测器；N2000色谱数据工作站（杭州天钊科技有限公司提供）；KQ-50M超声波清洗器（东莞市科桥超声波设备有限公司提供）；FA-1104电子天平等。 　　野黄芩苷标准品均由南京森贝伽生物科技有限公司提供（批号：110842-200605）；甲醇（色谱纯，津东天正精细化学试剂厂）；36%醋酸（烟台开发区鲁阳化学试剂公司提供）；水；其它试剂均为分析纯。 　　3 实验方法 　　3.1 检测色谱条件 　　岛津Shim-pack CLC-ODS（M）色谱柱（岛津国际贸易有限公司产品提供）；检测流动相为甲醇-水-乙酸，比例为35：61：4，柱温设定为25℃，流速为0.5 mL/min，色谱柱检测波长设定为335 nm；色谱柱灵敏度设置为0.05 AUFS；设备进样量为10μL；色谱外标峰理论板数参照野黄芩苷峰计算（≥1 500）。 　　3.2 检测溶液制备 　　选取半枝莲干燥样本粉末1g（经精密称重），采用索氏提取器加入50 mL石油醚，在60℃～90℃温度中提取至无色，取出后进行晾干处理；然后再在索氏提取器加入80 mL甲醇，反复提取至无色，尽量完全提取出野黄芩苷成分，经冷却、过滤，滤液置于100ml量瓶，使用甲醇反复洗涤容器，将洗涤溶液经过滤后置入同一量瓶中；采用甲醇进行稀释处理，摇匀后备检。同时，选取适量经真空干燥处理后的野黄芩苷对照品，加入甲醇后形成0.3 mg/mL野黄芩苷溶液作为对照品备检。 　　3.3 野黄芩苷线性关系分析 　　线性关系分析中选取试验野黄芩苷对照品20 mg，对照品经流动相溶解处理后形成一个浓度为0.40 mg/ml的50 ml野黄芩苷溶液；采取精密称重不同剂量的野黄芩苷溶液后分别配制成20ml野黄芩苷对照品溶液；吸取20μl不同浓度野黄芩苷对照品溶液注入色谱仪内，按照实验设定的色谱条件进行检测；绘制标准曲线，其中纵坐标为吸收峰面积、横坐标为野黄芩苷样品量，计算回归方程Y=2532509.08×-24741.89，r=0.9999。从标准曲线中可以看出，0.39～3.85μg浓度野黄芩苷与吸收峰面积呈良性线性关系。 　　3.4 野黄芩苷加样回收率 　　选取标准含量的半枝莲药材，然后加入定量野黄芩苷对照品，参照样品检测方法进行处理分析，结果显示：样品平均回收率达到98.4%，RSD=2.11%，这表明本文采用的检测方法具有较高的可靠性。 　　3.5 野黄芩苷样品含量检测 　　选取不同采收时间、不同药用部位（花、叶、茎、根、全草各1g）的半枝莲药材（各6份样品），经制备取样后，分别吸取10ml试验品溶液及对照品溶液，运用外标法计算出药材中野黄芩苷含量比例。 　　4 结果 　　4.1 不同采收时间野黄芩苷含量情况 　　通过本文实验室分别检测6、7、8月采收半枝莲药物进行检测，结果显示不同采收时间半枝莲野黄芩苷含量存在明显差异性，其中7月采收半枝莲中野黄芩苷含量相对较高，详见表1。 　　4.2 不同药用部位野黄芩苷含量情况 　　通过对半枝莲样品中的花、叶、茎、根、全草部位进行野黄芩苷含量检测，经液相色谱