TNFa基因多态性研究在肝脏疾病中作用.docVIP

TNFa基因多态性研究在肝脏疾病中作用 　　【关键词】基因多态性;肿瘤坏死因子;肝脏疾病 　　随着分子生物学技术的发展,对TNF的各种生物学活性#65380;结构的研究日趋深入,并且对TNF基因的多态性有一定的认识#65377;经研究发现在各类肝脏疾病中,TNF基因多态性与TNF表达量特征性升高有关,这种基因多态性与肝脏疾病的易感性及疾病的发生#65380;进展#65380;预后相关#65377;最近的研究进一步揭示了TNF-α水平增高的原因,认为是TNF-α多态性影响了TNF-α的转录,故从基因水平上分析了TNF-α与疾病的发生#65380;发展的关系#65377;TNFα多态性可能是机体对MHC相关疾病有易感性的原因#65377; 　　 　　1 TNF的来源? 　　 　　1975年cars well等[1] 发现接种BCG的小鼠注射LPS 　　后,血清中出现能杀伤某些肿瘤细胞或使体内肿瘤组织发生出血坏死的因子,称之为肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis factor ,TNF)#65377;根据来源不同可分为TNFα和TNFβ两种#65377;肝脏枯否氏细胞为体内最大的固定巨噬细胞池,是产生TNF的主要部位,说明TNF主要分布与肝脏#65377;? 　　 　　2TNF基因多态性? 　　 　　TNFA位于人类MHC第3区第6号染色体6p21处#65377;其中250Kb靠近HLA-B着丝粒侧,350Kb靠近HLA-C端粒侧#65377;有四个外显子和三个内含子#65377; Wilson AG等[2]人首先报道了 TNF-a 基因启动子区域内转录起始位点上游308位的双等位基因多态性 ,308位为鸟嘌呤核苷酸G时定义为 TNF 1 ,为腺嘌呤核苷酸A时定义为TNF2 ,TNFl较常见#65377;除一308位点外,TNF-a基因多态性还表现在-238#65380;-244#65380;-276#65380;-163#65380;+70位点G-A碱基的变化[3]#65377;? 　　TNF-β基因多态性位点主要有五种:3’非翻译区的内切酶EcoRI的RFLP多态性 ;5’非翻译区的一个多形性残基 ;第一内含子 +252位点和1069位点处G-A碱基变化,当第一内含子+252位点处为G时 ,能被 NcoI限制性内切酶识别切断,产生了识别位点G存在的基因称为TNF-β*1,A存在的基因称为TNF-β*2;第一个内含子368位点鸟嘌呤核苷酸G一胞嘧啶核苷酸C的碱基变化;TNF-β基因的第一个外显子的第三个碱基腺嘌呤核苷酸A一胞嘧啶核苷酸C的碱基变化 ,导致第26位氨基酸的改变,即AAC(天门冬酰胺)改变为ACC(苏氨酸)#65377;? 　　 　　3TNF基因多态性与转录? 　　 　　TNFA的表达主要在转录及转录后2个水平上进行[16]#65377;TNFA5′端包含大量的调节元件,以调节不同刺激状态下的TNF-a转录#65377;Kroeger等 [4]从3方面研究了TNF-a 基因一308位点多态性对转录的影响 #65377;首先 ,应用电泳泳动速度分析法(EMSA) 对TNF基因内上游323位点到上游285位点的区域进行检测 ,发现TNF1 和 TNF2对转录因子的结合能力不同,转录因子易与TNF2结合#65377;接着,研究了这个38 bp区域的序列作为一个异源系统增强子的活性,发现有TNF2 的重组体转录水平比TNF1重组体增加两倍,最后,为了研究一308多态性对TNF-a基因启动子转录的影响,把TNF2 和TNF1的上游993位点到下游110位点区域转染入Jurkat细胞或单核巨噬多活性的组织淋巴瘤细胞株U937细胞中,荧光素酶作报告基因,用植物血凝素(PHA)刺激转染后的细胞,结果发现在3’非翻译区(3?UTR)存在的条件下,一308A形式比一308G形式的转录活性高两倍#65377;这些研究强有力的证明了 基因一308位点的多态性影响转录,且TNF2的转录活性高于TNF1#65377;Stuber等[5]用PHA刺激 Jurkat细胞和脂多糖(LPS) 诱导的巨噬细胞中TNF1和TNF2的转录活性没有差异,但是他们的研究中没有应用3’UTR#65377;Kroner[4]等的研究表明,在没有3’UTR存在的而只有TNF1和TNF2的情况下,基因的表达无差异#65377;? 　　Bfinkman等[3]在 TNF-a 3′UTR存在的条件下,在Jurkat细胞中对TNF1和TNF2转录活性的研究也没有发现差异,尽管TNF2重组体的转录活性比1N 重组体稍高,但无统计学意义#65377;值得注意的是Bfinkman等[3]应用的重组体中包括一个新发现的3’末端NFkB位点,Kr