TNFα和IL6在扁平苔藓中表达和意义.docVIP

TNFα和IL6在扁平苔藓中表达和意义 　　 　　 　　【摘要】　目的　检测扁平苔藓患者皮损处肿瘤坏死因子α(TNFα)和白介素6(IL6)的表达，探讨其在扁平苔藓发病过程中的作用。方法　选取30例扁平苔藓组织和30例正常皮肤组织，采用免疫组织化学技术观察TNFα和IL6的表达。 结果　TNFα和IL6在扁平苔藓组中的表达均高于在正常皮肤组中的表达(P0001)且二者在扁平苔藓皮损处的表达呈正相关(r=0804,P0001)。结论　TNFα和IL6的高表达可能参与了扁平苔藓的发病。 　　【关键词】　扁平苔藓；肿瘤坏死因子α；白介素6 　　 　　 　　扁平苔藓(Lichen Plsnus)是一种常见慢性炎症性皮肤病，目前发病机制和原因仍不十分清楚，其组织病理表现为基底细胞液化变性，真皮浅层以T淋巴细胞为主的带状浸润，提示了免疫细胞介导的局部反应。T淋巴细胞在许多细胞因子的产生中起着重要的作用［1］，同时细胞免疫反应受到各种细胞因子及其受体的调节，因此，这些细胞因子可能参与了扁平苔藓的病理过程。大量研究发现,白介素6(IL6)是自身免疫疾病中的关键炎症因子，而肿瘤坏死因子α(TNFα)在体内细胞因子网络中起着重要的调节作用,TNFα能上调IL6及TNFα自身的表达。本研究通过观察TNFα和IL6在扁平苔藓皮损中的表达变化，进一步揭示它们在扁平苔藓发病机制中发挥的作用。 　　1　资料与方法 　　11　一般资料　病例组30例(男性16例，女性14例)，均为我院皮肤科门诊2011年1月至2012年7月经临床和组织病理确诊为扁平苔藓的患者，年龄19～68岁，平均(42±642)岁。取材部位为躯干四肢典型皮损，所有病例近3个月内未用激素、免疫调节剂，均无全身系统性疾病。对照组30例(男18例，女12例)来源于我院整形外科和普外科的正常皮肤组织，年龄26~64岁，平均(38±864)岁，无任何皮肤病及系统性疾病。两组性别和年龄差异均无统计学意义。 　　12　试验试剂　兔抗人IL6多克隆抗体由北京博奥森生物技术有限公司提供，兔抗人TNFα多克隆抗体由武汉博士德生物技术公司提供，二步法PV6001免疫组织化学检测试剂盒及DAB显色试剂盒、PBS缓冲液等试剂均购自北京中杉金桥生物技术公司。 　　13　试验方法　① 免疫组化二步法检测组织中TNFα和IL6的表达：所有标本用4％中性缓冲液甲醛固定，常规乙醇脱水，石蜡包埋和厚4 μm连续切片；用蒸馏水配制新鲜的3%H2O2阻断内源性过氧化物酶,然后将切片浸入pH60、001 mol／L的枸橼酸缓冲液中高压加热抗原修复(两者均加热30s)；滴加一抗(兔抗人TNFα浓缩液稀释为1∶100，兔抗人IL6浓缩液稀释为1∶150)，阴性对照用PBS溶液取代一抗进行对比实验，37℃孵育1 h，滴加二抗；DAB显色；37℃孵育15 min后苏木素复染，常规脱水、透明、封片。②免疫组化结果判定：免疫组化结果以胞浆和(或)胞核可见棕黄色颗 　　粒为阳性，阴性无着色。由于积分光密度值(IOD)与染色强度成正比，以IOD值代表阳性产物表达的强度。每张切片随机选取5个高倍视野(×400)，采用MIAS2000图像分析系统分析阳性区域IOD值，测定每个视野的IOD值，取平均值为该标本的IOD值。 　　14　统计学方法　数据以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 130统计软件进行分析，两组间比较采用两样本t检验，指标间相关性采用Pearson相关析，P005为差异有统计学意义。 　　2　结果 　　免疫组化结果显示：在扁平苔藓皮损中，TNFα、IL6两者的阳性表达主要分布在表皮角质形成细胞和真皮浅层淋巴细胞的胞浆中；在正常皮肤组织中呈阴性或弱阳性表达。两者在扁平苔藓皮损处的表达明显高于在正常皮肤组织中的表达。差异均有统计学意义(P0001)。扁平苔藓皮损中TNFα、IL6的表达呈正相关(r=0804，P0001)。扁平苔藓组与正常皮肤组之间TNFα、IL6的IOD值比较见表1。 　　3　讨论 　　大量研究表明，扁平苔藓是T淋巴细胞介导的局部炎症反应，多种炎症介质参与了扁平苔藓的发病［2］。TNFα基因定位于6号染色体HLADR基因和HLAB基因位点之间的HLAIII抗原基因簇上，其长度约276 kb，由四个外显子和三个内含子组成。皮肤处的TNFα多由单核巨噬细胞、角质形成细胞和激活的T淋巴细胞产生，是一种具有广泛生物活性的细胞因子，同时也是一个免疫反应的关键性细胞因子，参与机体炎症和免疫应答的调节。TNFα能增加前炎症细胞因子即IL1，IL6