miR222在糖尿病肾病中表达变化及临床意义.docVIP

miR222在糖尿病肾病中表达变化及临床意义 　　摘要：目的探讨miR-222在糖尿病肾病患者血清中的表达及临床意义。方法采用qRT-PCR方法检测35例糖尿病肾病患者和35例健康对照者血清中mi-222 的表达水平，并分析miR-222的表达水平与各临床病理参数的关系。结果miR-222在糖尿病肾病患者血清中的表达水平明显高于健康对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)；经相关性分析显示，miR-222在尿毒症组糖尿病肾病患者血清中的表达水理较非尿毒症组明显增高(P＜0.05)。结论miR-222在糖尿病肾病患者血清中表达上调可能参与糖尿病肾病的发病进程。 　　关键词：miR-222；糖尿病肾病；实时荧光定量PCRmiRNA是一类长度约为22nt的单链，非编码RNA分子，能与靶基因3′非编码区特异性结合，在转录后水平调控基因的表达，从而导致靶mRNA降解和翻译阻遏[1]。miRNAs大约调控人类1/3的蛋白编码基因的表达。miRNAs 调控重要的生物学过程，包括发育、细胞增殖和凋亡、细胞分化、代谢等[2]。miR-222在多种疾病中表达异常，然而在糖尿病肾病（DN）血清中的表达情况尚未见报道，本次研究通过运用qRT-PCR技术检测miR-222在糖尿病肾病患者血清中的表达，从而分析其与各临床病理参数之间的意义。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料选择35例于2011 年8 月~2013 年7 月在南华大学第一附属医院内分泌科确诊为糖尿病肾病患者作为研究对象。收集其血清标本共35例，其中男15例，女20例；年龄35~72岁，平均（54.2±4.6）岁；DN按临床分期分为五期，其中Ⅰ-Ⅳ期(非尿毒症组)为21例，Ⅴ期(尿毒症组)为14例。选取35例健康体检的正常血清作为阴性对照。所有标本于-80℃保存，以上标本收集均通过衡阳市及本院伦理委员会批准并签署了知情同意书。 　　1.2主要试剂用于qRT-PCR的miRNA引物由invitrogen公司合成；RNA 抽提试剂盒、miRNA cDNA合成试剂盒和qRT-PCR miRNA Detection Kit购自广州锐博生物技术公司。 　　1.3 qRT-PCR实验方法采用RNA抽提试剂盒提取标本中总RNA，逆转录合成cDNA。PCR扩增反应为20μl体系，包括：Taq DNA polymerase 5U/μl）0.2μl，2×SYBR Mix 10μl，miRNA RT product 2.0μl， MiR-PCR primers（5μM）0.4μl，灭菌蒸馏水7.4μl。循环体系为: 95°C 3inin, 95°C 12s. 62°C 35s, 72°C 30s, 40 个循环。以β-actin为内参，所测定的miRNA的相对表达量采用2-ΔΔCT法分析。 　　1.4统计学处理采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。所有结果均以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，当P0.05时，为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1 miR-222在DN患者和健康对照者血清中表达水平的检测收集35例DN患者和35例健康对照者血清，提取血清中总RNA，运用实时荧光定量PCR检测血清中miRNA-222的表达水平。结果显示，35例DN患者血清miR-222的表达水平是健康对照者的8.801倍。选取1例健康对照者血清的miR-222的值为1，然后分析得到35例DN患者血清miR-222的平均表达水平（2-△△CT）为3.582±0.146，健康志愿者血清中miR-222的平均表达水平（2-△△CT）为0.407±0.095，二者相比，差异具有统计学意义（P0.05）。结果提示，血清miR-222在DN患者血清中表达明显上调。 　　2.2 DN患者血清中miR-222的表达与其临床病理参数的关系以DN患者血清中miR-222表达值的中位数为临界值，miR-222表达值大于等于中位数者为高表达，小于中位数者为低表达。结果显示，miR-222在35例DN患者中有28例高表达（80%），17例低表达（48.6%）。经相关性分析发现，DN患者血清中miR-222的表达与患者年龄（60岁分界）、性别无明显相关，差异无统计学意义(P0.05)；然而却与患者的临床分期相关，即miR-222在尿毒症期DN患者血清中的表达水平高与非尿毒症期DN患者血清中的表达水平，差异有统计学意义(P0.05)。 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　3讨论 　　糖尿病肾病(DN)是我国慢性肾脏疾病的主要病因之一，是导致尿毒症的第二大病因，在很大程度上促使了糖尿病患者的死亡。因此，DN 严重危害了糖尿病患者的健康与生命。D