TGR5多种配体抑制高脂饮食小鼠肥胖及高血糖效果对比研究.docVIP

TGR5多种配体抑制高脂饮食小鼠肥胖及高血糖效果对比研究 　　[摘要]目的：本研究通过建立肥胖小鼠动物模型，分析比较胆汁酸膜受体TGR5多种配体的减肥及降糖效果，以筛选出TGR5最佳配体。方法：选取6周龄C57BL/6野生型小鼠，随机分为2组，分别用NF、HF喂养10周后，NF组小鼠采用NF继续喂养10周；将HF组小鼠分为7组，分别用HF、HF+OA（H）、HF+OA（L）、HF+CDCA、HF+CA、HF+DCA、HA+LCA喂养10周。共喂养20周后进行糖耐量实验、测定血清胰岛素水平并取肝脏脂肪组织做病理学观察，RT-PCR法检测脂肪酸合成与脂肪代谢相关基因表达情况。喂养过程中每周监测小鼠体重。结果：TGR5多种配体可激活TGR5调节肥胖小鼠体内糖脂代谢，降低小鼠体重、提高小鼠糖耐量水平，激活脂肪酸合成及氧化相关基因的表达，其中以OA（H）、CDCA和cA作用较为显著。结论：OA（H）、CDCA和CA可有效降低体重、提高糖耐量水平、降低血清胰岛素水平、缓解肝脏脂质沉积及调节脂肪代谢相关基因的表达。 　　[关键词]TGR5配体；褐色脂肪；肥胖；糖脂代谢 　　[中图分类号]R589.2 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2017）07-0032-05 　　肥胖已成为当代重大公共卫生问题之一，并可增加高血压、冠心病和糖尿病等的发病风险。肥胖，即为白色脂肪组织（white adipose，WAT）的积累，于能量摄入大于能量消耗时发生。减肥和增加体力活动被认为是治疗肥胖最有效的方法，但是在许多情况下，这些生活方式的改变并不能长期坚持。另外，许多减肥药也因其不良副作用而退出市场，因此，开发新的安全有效的减肥药物成为治疗肥胖不可或缺的手段。 　　TGR5是首个被鉴定的胆汁酸膜G蛋白偶联受体，在糖类及能量代谢中均发挥着重要作用。TGR5高表达于褐色脂肪组织（brown adipose tissue，BAT）线粒体，在调节糖代谢中起着重要作用。前期研究发现，激活TGR5能够消耗能量达到减肥的效果，那么天然或半合成的TGR5的配体就很有可能开发为减肥药物。齐墩果酸（oleanolic acid，OA）是TGR5的天然植物配体，可使高脂饮食的动物体重下降，而且已被证实这种作用是通过激活TGR5实现的。除了OA外，初级胆汁酸胆酸（cholic acid，CA）和鹅去氧胆酸（chenodeoxycholic acid，CDCA），次级胆汁酸脱氧胆酸（deoxycholie acid，DCA）和石胆酸（lithocholic acid，LCA），亦是TGR5天然配?w，均可作为信号分子参与能量代谢。胆汁酸-TGR5-cAMP-D2-T3-UCP信号通路在调节能量平衡和降低体重方面有着重要的作用。在本次研究中，笔者采用高脂饮食诱导形成后天肥胖小鼠模型，评估胆汁酸不同配体降低高脂肪饮食引起的肥胖和改善葡萄糖耐量的能力，以筛选出TGR5最佳配体，为抗肥胖药的发展提供理论基础。 　　1材料和方法 　　1.1实验动物：选取6周龄C57BL/6野生型小鼠，体重15～20g，饲养于福建医科大学实验动物中心，随机分为实验组和对照组。所有动物均按照实验动物护理和使用指南予以对待，所有实验均获得福建医科大学附属协和医院伦理委员会的批准并依据委员会指导方针进行。 　　1.2试剂：OA、CDCA、DCA、LCA、CA，均购自Sigma（St.Louis，MO，USA）；苏木精伊红和血清胰岛素检测试剂盒购自罗氏应用科学（Indianapolis，IN，USA）；其他试剂均购自Sigma。 　　1.3营养性肥胖动物模型的建立：所有小鼠置于25℃环境中，12h光照/12h黑暗交替。实验组小鼠饲喂高脂饲料（碳水化合物40%，蛋白质13%，脂肪40%，其他7%），即高脂（high fat diet，HF）组；对照组饲喂普通饲料（碳水化合物60%，蛋白质22%，脂肪10%，其他8%），为正常饮食（normal food diet，NF）组。动物自由摄食和饮水。 　　1.4药物干预：小鼠肥胖模型成功建立后，盯组小鼠随机分为七组（n≥5），一组采用单纯盯持续饲养，其余各组高脂饲料中加入不同干预药物：OA（H）：100mg/kg，OA（L）：80mg/kg，CDCA：5g/kg，DCA：2g/kg，LCA：1g/kg，CA：5g/kg，持续10周，每周监测小鼠体重。 　　1.5葡萄糖耐量实验与血清胰岛素水平检测：喂养结束后，小鼠饥饿16h，然后给予腹腔内注射葡萄糖（2g/kg），并以微型血糖仪（中国宁波kingkerry医疗器械有限公司）监测从0～120min时的血糖变化；血清胰岛素水平使用ELISA试剂盒测量，全血在4℃离心机中以2000g离心10m