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一株细菌产生的脂肪酶性质研究 　　摘要：从郑州油脂厂附近的土壤中筛选到一株产脂肪酶细菌，对该细菌的脂肪酶性质进行了初步研究。结果表明，该酶的最适反应温度为４０℃，５０℃以下稳定性良好；４０℃时的最适反应ｐＨ值为７；在ｐＨ值为１０时酶活力最高，ｐＨ值５～１２时酶活性较为稳定；超声波处理对酶活力的影响较大，处理时间不应超过１０ｍｉｎ；研究表明该酶是具有良好开发前景的脂肪酶新酶种。 　　关键词：细菌；脂肪酶；性质研究 　　中图分类号：Ｑ５５６＋．１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）01－0053-03 　　 　　Study on the Character of a Lipase Produced by a Bacterium 　　 　　ＺＨＡＮＧ Ｙｏｎｇa，ＳＵＮ Ｘｉｎ－ｃｈｅｎｇb，ＷＡＮＧ Ｋａｉ－ｆａｎｇb，ＹＡＮＧ Ｔａｏb，ＺＨＡＮＧ Ｌｉb 　　（Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ， a. Logistic Dept； b. School of Food and Bioengineering，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００２，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒ ｏｆ ａｎ ａｌｋａｌｉｎｅ ｌｉｐａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｏｉｌｙｓｏｉｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｎｅａｒ ｔｈｅ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ gｒｅａｓｅ pｒｏｄｕｃｉｎｇ fａｃｔｏｒｙ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｏｎａｌ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐａｓｅ ｗａｓ ４０℃，the activity of it was stable under 50℃ below， ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｏｎａｌ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐＨ ａｔ ｔｈｉｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ７， the activity of it was highest when pH was 10 and was the most stable when pH was 5~12． Ｂｅｓｉｄｅｓ， ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｏｕｌｄ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐａｓｅ ｇｒｅａｔｌｙ， the treatment time shouldn’t exceed 10min． Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｉｐａｓｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｗｅｌｌ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂａｃｔｅｒｉｕｍ； ｌｉｐａｓｅ； ｃｈａｒａｃｔｅｒ’s study 　　 　　脂肪酶（Ｌｉｐｏｌｙｔｉｃ ａｃｙｌ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）是一类能在油水界面上催化类脂化合物分解、合成和酯交换反应的酶［１，２］。它能催化天然底物油脂（甘油三脂）水解，产生脂肪酸和甘油，在水解过程中，存在中间产物甘油单酯和甘油二酯［２］。脂肪酶在催化酯类化合物的分解、合成和酯交换过程中，具有严格的化学选择性和高度的立体异构专一性，且反应不需要辅酶，反应条件温和，副产物少［３，４］。 　　来源不同的脂肪酶，其酶的特性不同，最适作用温度和ｐＨ值也会有所不同。大多数脂肪酶的最适作用温度在３０～６０℃之间，最适作用在中性或碱性环境中，一般稳定在ｐＨ值３～１０之间。本文针对从含油脂土壤中分离筛选出的菌株的脂肪酶性质进行初步研究，以期为新酶种的研究提供理论依据，现将结果报告如下。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１菌种来源从郑州油脂厂附近的土壤中，筛选到一株产碱性脂肪酶活性较高的革兰氏阴性细菌。 　　１．１．２培养基成分及配制方法①发酵培养基：蛋白胨３.0％，蔗糖０．５％，橄榄油０．５％，（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．１％，ＭｇＳＯ４?７Ｈ２Ｏ ０．１％，Ｋ２ＨＰＯ４ ０．１％，１２１℃灭菌２０ ｍｉｎ。②保藏培养基：ＮａＮＯ３ ０．２00％，ＭｇＳＯ４?７Ｈ２Ｏ ０．０５0％，ＫＣｌ ０．０５0％，Ｋ２ＨＰＯ４ ０．１00％，ＦｅＳＯ４?７Ｈ２Ｏ ０．００１％，蔗糖３.000％，琼脂２．５％，１２１℃灭菌２０ ｍｉｎ，做成斜面。 　　１．２方法 　　１．２．１脂肪酶细菌的发酵用接种环从保存的斜面上刮取１环高产脂肪酶菌株斜面，接种到２５０ ｍＬ液体发酵培养基中，２９℃培养７２ ｈ后，将发酵液１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，弃沉淀，上清于－２０℃保存用以后续试验。 　　１．２．２酶活性测定酶活性的测定方法参见参考文献［５］中的碱滴定法，具体操作步