不同养殖密度和换水频率对蚂蟥生长和内在品质影响研究お.docVIP

不同养殖密度和换水频率对蚂蟥生长和内在品质影响的研究お 　　[摘要]采用生物量测定、3，5二硝基水杨酸比色法、对棕榈酸硝基苯酯（ρNPP）比色法、福林酚法等方法研究不同养殖密度和换水频率对蚂蟥生长、消化酶活性、生化指标和内在品质的影响。结果表明：蚂蟥的最终质量，特定生长率（SGR），增重率（WGR），淀粉酶，脂肪酶，蛋白酶活力，SOD，CAT，ALP酶活性与密度呈反比，与换水频率呈正比（P005）；换水频率与水中氨氮、亚硝酸盐和硫化氢呈负相关，与溶氧量呈正相关；养殖密度和换水频率对蚂蟥水分、总灰分、酸不溶性灰分、pH和抗凝血酶活性影响不显著。因此，每亩50万条为较适宜的养殖密度，每72 h 1次为较适宜的换水频率。 　　[关键词]蚂蟥；养殖密度；换水频率；生长；消化酶；抗逆酶 　　蚂蟥Whitmania pigra Whitman，又名宽体金线蛭，属于环节动物门黄蛭科动物[1]，其干燥全体为中药材水蛭，是《中国药典》2015年版水蛭药材收载主要来源，具有破血通经，逐瘀消?Y的功效[2]。由于市场对水蛭药材的巨大需求以及环境污染的日益加重，导致野生蚂蟥资源濒临枯竭。目前虽然蚂蟥室外人工养殖技术取得了初步成功，但仍存在许多诸如水温、光照等不可控因素，严重影响了产量和经济效益。近几年来有关蚂蟥适宜生长的温度、呼吸和消化等生理特性以及分子生物学都进行了相关研究 [38]，但鲜见养殖密度和换水频率对蚂蟥生长影响的相关研究报道，本实验拟研究不同养殖密度和换水频率对蚂蟥生长和内在品质的影响，以期为蚂蟥室内养殖提供参考和依据。 　　1材料 　　蚂蟥由南京农业大学中药材研究所提供，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥W pigra；螺蛳（采自南京前湖，野生）经郭巧生教授鉴定为梨形环棱螺Bellamya purificata Heude；曝气24 h的自来水。 　　电子天平（山海精密仪器厂）、5810R离心机（eppendorf）、756CRT紫外分光光度计（上海精密仪器有限公司）、FA1104分析天平（上海精科天平厂）、匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）、pH计（青岛昱昌科技有限公司）、FW100小型高速粉碎机（天津华鑫仪器厂）、KQ250B超声仪（昆山市超声仪器公司）、电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）、HHS型水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）、MR210A溶氧测量仪（南京特安科贸有限公司）、YC07型水质分析仪（青岛昱昌科技有限公司）。 　　DNS试剂、ρNPP溶液、福林酚试剂、考马斯亮蓝G250、连苯三酚、324 mmol?L-1钼酸铵溶液、50 mmol?L-1对硝基苯磷酸二钠。 　　2方法 　　21实验设计实验在室内进行，容器为容积2 L的塑料瓶（瓶底面积133×10-2 m2，实际养殖用水1 L，水深12 cm），实验蚂蟥体重为（095±016） g。设5个养殖密度，分别为1（按照瓶底面积算，相当于5万条/亩），5，10，15，20条/瓶，分别标记为SD1，SD2，SD3，SD4，SD5组，每个处理重复10次，24 h换水1次。设置5个换水频率，分别为每隔12，24，48，72，96 h 换水1次，每次换水1 L，每瓶10条蚂蟥，每个处理重复10次，分别标记为H1，H2，H3，H4，H5组。实验期间其他管理方法相同，投喂经自来水暂养3 d后的新鲜螺蛳，实验时间40 d，期间保持室温（25±1） ℃。 　　22样品的采集和保存实验结束时，每个平行组随机取10条蚂蟥，将活蚂蟥于冰盘内解剖，取消化道，用预冷生理盐水冲洗，滤纸吸干表面水分，称重，冰浴中匀浆，用生理盐水稀释成含原浆20%的溶液，冷冻离心10 min（转速为1万r?min-1），取上清液为酶液，置于4 ℃冰箱中保存，并在24 h内测定完成。 　　每个平行组随机选取15条蚂蟥，在50 ℃条件下干燥24 h，粉碎后过40目筛，置于试剂瓶中干燥避光保存，用于测定内在品质。 　　23生长性能的测定分别在实验开始和结束时称量各瓶中蚂蟥的体重，计算出平均质量，由公式计算特定生长率（SGR）和增重率（WGR）。SGR=（lnWt-lnW0）/t×100%；WGR= （Wt-W0）/W0×100%，式中W0为实验开始时蚂蟥的平均质量（g），Wt为结束时蚂蟥的平均质量（g），t为实验天数（d）。 　　24消化酶活性的测定方法蛋白酶活性测定采用福林酚法[9]在37 ℃，pH分别为32，92时，每分钟水解干酪素产生1 μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位（U）；淀粉酶的活力测定采用3，5二硝基水杨酸比色法[9]在37 ℃时，单位体积酶量，每分钟水解淀粉生成1 mg还原糖的产量为1个酶活力单位（U）；脂肪酶活力测定采用对棕榈酸硝基苯酯（ρNPP）比色法[10]在37 ℃