不同采收期枳实促胃肠动力作用及其辛弗林含量比较研究.docVIP

不同采收期枳实促胃肠动力作用及其辛弗林含量的比较研究 　　[摘要]目的：比较不同采收期枳实促胃肠动力作用及辛弗林含量的差异。方法：使用不同采收期枳实的提取物对正常小鼠连续灌胃7d，测定在体小肠碳末推进率和胃残留率；利用HPLC测定辛弗林的含量。结果：不同采收期枳实中辛弗林含量以及对正常小鼠的小肠推进作用均存在一定差异，但辛弗林含量的高低与小肠推进作用并不呈线性相关。结论：枳实促胃肠动力可能是其中多种成分协同作用的结果，枳实药材宜增加相关活性成分分析建立多指标质量控制方法。 　　[关键词]枳实；辛弗林；胃肠动力；不同采收期 　　枳实来源于芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，江西是枳实的道地产区之一，而江西新干县、樟树等道地产区资源调查表明，江枳实的基源植物主要为酸橙。目前，中国药典以辛弗林含量作为枳实药材质量控制的定量指标。文献分析不同品种如酸橙和甜橙、不同产地如江西、四川、湖南及福建枳实药材中的辛弗林含量差异较大，炮制方法和采收时间也有显著影响，且随着果实的逐步发育成熟，辛弗林的含量呈降低趋势。关于辛弗林含量测定方法的文献研究也屡见报道，如2D-HPLC、固相萃取-HPLC等。枳实为常用理气类中药，研究表明枳实水煎液和辛弗林能促进正常小鼠小肠推进，枳实还可改善功能性消化不良大鼠的胃排空。 　　采收时间是影响中药材质量的重要因素之一，酸橙在每年春季5月初开花，5月中下旬至6月下旬自然脱落的幼果作为药材枳实，至7月初果皮尚绿时的未成熟果实则当作枳壳药用；部分植株在秋季可二次开花结果，其幼果也被当作枳实销售。不同采收期枳实药材的大小较为悬殊，从小到大依次称为鸡眼枳实、鹅眼枳实、小片、中片及大片。这些枳实均在市场上销售、使用，然在在药效方面是否存在显著性差异尚未见文献报道，秋季枳实中的成分和药效等各方面亦无相关研究。本实验观察不同采收期枳实对在体小鼠小肠碳末推进率和胃残留率的差异，并结合HPLC测定相应的辛弗林含量进行对比分析，为制定适宜采收期及完善质量标准提供依据。 　　1.仪器与材料 　　1.1药材 2014年采集于江西省樟树市昌傅镇下余村，1～4号分别为5月下旬、6月中旬、6月下旬及10月中旬采收，经鉴定为芸香科植物酸橙C.aurantium L的幼果。 　　1.2动物 清洁级昆明种小鼠50只，体重20-25 g，雄性，由江西中医药大学阳明实验动物中心提供，许可证号：SCXK（赣）2011-0001。 　　1.3仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪（G1311C四元泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B DAD检测器、Agilent 1260LC化学工作站，美国Agilent Technologies公司），METFLER TOLEDOXS3DU百万分之一电子分析天平（瑞士METTLERTOLEDO公司）。 　　2.小肠推进及胃排空作用的实验方法与结果 　　2.1药物的制备 分别称取枳实药材适量，粉碎为中粉，加入适量蒸馏水，水煎煮提取2次，每次30min，合并滤液并浓缩，制成每lmL相当于1g原药材的提取液。 　　2.2给药及指标测定 50只小鼠随机分为5组，每组10只，即4个枳实样品组和空白对照组。样品组小鼠按4g/Kg分别给予不同产地枳实提取物，空白组给予等体积生理盐水。连续灌胃给药7d，每日1次。末次给药后，动物禁食12h，小鼠灌胃给予炭末混悬液0.5mL（2%CMC-Na和5%炭末），20min后处死动物，剖腹取出上端自幽门、下端至回盲部的肠管，铺直后测量幽门至回盲部全长（小肠总长度）及幽门至炭末前沿的距离（炭末推进长度），计算小肠推进百分率；结扎上述小鼠的胃贲门和幽门，取滤纸拭干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后用滤纸拭干，称取胃净重，胃全重和胃净重差值为胃内残留物重，并计算与所灌炭末混悬液质量的百分比为胃残留率。 　　2.3统计学方法 数据采用SPSS 22.0统计软件进行统计分析，计量资料采用t检验，P0.05表示差异有统计学意义。 　　2.4结果 由表1可知，样品组碳末小肠推进率均大于空白组，其中1、3号枳实组的小肠推进率与空白组比较有统计学差异（P0.05）。 　　3.HPLC测定辛弗林的方法与结果 　　3.1色谱条件与系统适用性 色谱柱：TSK-GELODS（250mm×4.6mm，5lxm）；流动相：乙腈-水（25：75，水中加0.1%磷酸和0.1%SDS）；流速：1.0mL/min，柱温：30℃；进样量：20uL；检测波长：275nm；理论塔板数15000。对照品及样品色谱图见图1。 　　3.2对照品溶液的制备 精密称取辛弗林适量，加甲醇溶解于容量瓶中配制成693.00ug/mL浓度的对照品溶液。 　　3.3样品溶液的制