不同浸提剂及对照设置对土壤脲酶活性测定影响.docVIP

不同浸提剂及对照设置对土壤脲酶活性测定的影响 　　摘要：关于土壤脲酶活性的测定，不同学者选用的浸提剂以及对照的设置往往大相径庭，对于这些不同处理方式测得的脲酶活性的差异，目前还缺乏相应的比较研究。选用1.0 mol/L KCl+0.01 mol/L HCl、2.5 mol/L KCl+0.1 mmol/L Ag2SO4、2.5 mol/L KCl、2.0 mol/L KCl以及1.0 mol/L KCl等5种不同的浸提剂，设置对照培养2 h与对照不培养2种对照方法，以洪泽湖湿地土壤为例，比较不同浸提剂及对照设置方法间土壤脲酶活性的差异。结果表明，在对照培养条件下，测得的脲酶活性最大达到0.098 μg/（kg?h），浸提剂1.0 mol/L KCl+0.01 mol/L HCl；脲酶活性最小为0.035 μg/（kg?h），浸提剂2.5 mol/L KCl+0.1 mmol/L Ag2SO4。与对照不培养组相比，对照培养2 h组更容易获得较高的脲酶活性，当浸提剂分别为2.5 mol/L KCl+0.1 mmol/L Ag2SO4、2.0 mol/L KCl、1.0 mol/L KCl+0.01 mol/L HCl 时，对照培养组土壤脲酶活性分别是对照不培养的1.6、3.0、7.5倍。对于不同的抑制剂而言，1.0 mol/L KCl+0.01 mol/L HCl 是1.0 mol/L KCl的1.58 倍，而2.5 mol/L KCl+0.1 mmol/L Ag2SO4与2.5 mol/L KCl的差异较小，差值仅为0.001 μg/（kg?h）。 　　关键词：土壤；脲酶活性；浸提剂；对照培养 　　中图分类号： S154.2 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）11-0427-03 　　在土壤酶中，脲酶催化土壤中尿素酰胺态氮水解为铵态氮，在土壤氮元素的循环与转化过程中扮演重要角色[1-3]。脲酶活性是评价生态系统氮素转化机制及其功能演变时最常见的酶学指标。土壤脲酶活性的测定有比色法、扩散法、尿素剩余量测定法、电极法、CO2量度法等[4-6]多种方法，其中比色法由于测量结果精确性较高、重现性较好、仪器设备简单，应用最为广泛。非甲苯法[7]因为没有甲苯的加入因而更加注重脲酶对于尿素的水解功能，是比色法中最常应用的方法。对于非甲苯法，可以选择不同的浸提剂，如有的学者采用 2.5 mol/L KCl+0.1 mmol/L Ag2SO4混合液或者1.0 mol/L KCl+0.01 mol/L HCl，在浸提剂加入的同时加入抑制剂阻止脲酶的进一步水解；而有的学者直接采用2.0 mol/L KCl进行浸提。并且对于对照的处理方法也不尽相同，有的是在土样培养之后加入底物尿素[7]；有的则是与处理同步加入底物，但对照处理不进行培养[8]。抑制剂是否可以有效地抑制酶的活性、这些不同的处理方式测出的脲酶活究竟会有什么差异，目前还缺乏相应的比较与研究。本研究以洪泽湖湿地为原型区域，采集湿地沉积物样品，采用非甲苯法并使用5种不同的浸提剂（1.0 mol/L KCl+0.01 mol/L HCl、2.5 mol/L KCl+0.1 mmol/L Ag2SO4、2.5 mol/L KCl、2.0 mol/L KCl、1.0 mol/L KCl），同时设立对照培养2 h与对照不培养2种不同的对照试验，对脲酶活性进行检测，以期明确不同浸提剂及不同对照设置对土壤脲酶活性测定的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验土壤取自于洪泽湖湿地，取0～20 cm的表层沉积物自然风干后，碾碎，过2 cm筛，备用。供试土样的全氮、全碳含量分别为0.675、0.1 g/kg。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 脲酶活性的测定 选用水杨酸钠-二氯异氰尿酸钠比色法测定脲酶活性[6-11]。（1）称取5 g土壤样品，置于 100 mL 的有盖容器内，加入2.5 mL 0.08 mol/L尿素水溶液，密封后在37 ℃下恒温培养2 h。培养结束后，打开塞子，加入2.5 mL蒸馏水，然后加入50 mL 5种不同的浸提剂（1.0 mol/L KCl+0.01 mol/L HCl、2.5 mol/L KCl+0.1 mmol/L Ag2SO4、2.5 mol/L KCl、2.0 mol/L KCl、1.0 mol/L KCl）振荡30 min，转速180 r/min，将振荡后的土壤悬浊液迅速过滤，取1.0 mL滤液于10 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀，倒入25 mL小烧杯中，并依次加入 5 mL 的水杨酸钠和2 mL的二氯异氰尿酸钠溶液。室温下?o置30 min，以蒸馏水为参比，用紫外可见分光光度计在 690 n