七氟醚与大鼠缺血性脑水肿脑组织内水通道蛋白4表达影响.docVIP

七氟醚与大鼠缺血性脑水肿脑组织内水通道蛋白4表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨七氟醚对大鼠缺血性脑水肿脑组织中水通道蛋白4（AQP4）表达的影响。 方法 选择健康SD大鼠90只，随机分为三组：假手术组、大脑中动脉栓塞（MACO）组、七氟醚预处理组，每组各30只；各组分别按术后6、24、48 h 3个时间点分为3个亚组，每个亚组各10只。分别在术后6、24、48 h检测脑组织含水量，采用RT-PCR检测脑组织中AQP4 mRNA基因表达。 结果 ①MACO组及七氟醚预处理组术后6、24、48 h的AQP4 mRNA光密度积分均高于假手术组，差异有统计学意义（P 0.05）；七氟醚预处理组术后6、24、48 h的AQP4 mRNA光密度积分[（1.2743±0.0460）、（1.3454±0.0450）、（1.4443±0.0740）分]均高于MACO组[（1.4385±0.0540）、（1.5370±0.0580）、（1.6489±0.0940）分]，差异有统计学意义（P 0.05）。②MACO组及七氟醚预处理组术后6、24、48 h的脑组织含水量均高于假手术组，差异有统计学意义（P 0.05）；七氟醚预处理组术后6、24、48 h的脑组织含水量[（75.8±6.8）%、（77.6±8.9）%、（76.3±6.4）%]均低于MACO组[（78.4±6.5）%、（80.1±7.6）%、（83.4±7.2）%]，差异均有统计学意义（P 0.05）。 结论 脑水肿形成与AQP4的表达有密切关系，七氟醚对脑组织内AQP4的基因表达有抑制作用，进而抑制脑水肿的发展。 　　[关键词] 水通道蛋白4；七氟醚；缺血性脑水肿 　　[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）06（c）-0027-03 　　缺血性脑血管病具有高发病率、高病死率和高致残率，脑水肿是在脑缺血后的影响临床预后和导致病情恶化的主要原因。水通道蛋白（aquaporins，AQPs）是水分子跨膜转运的主要分子，在脑组织中水通道蛋白-4（aquaporin-4，AQP4）分布范围广泛，对水的通透作用具有高选择性[1-2]。在脑组织维持电解质平衡起重要作用，影响着脑水肿的形成及消退。七氟醚是卤代烃基醚类挥发性吸入麻醉药物，具有麻醉诱导起效快、苏醒时间短、呼吸道刺激性小等特点，同时也可以保留中枢自主调节功能，促进脑血流增加，常用于神经外科手术疾病[3]。本组研究七氟醚预处理后对大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP4 mRNA表达的影响，分析大鼠缺血性脑水肿早期脑水含量和AQP4 mRNA表达的变化规律，现报道如下： 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及处理 　　采用健康清洁级SD成年大鼠90只，体重190～220 g，由实验动物中心提供，雌雄不限，动物房饲养环境，自由饮食，室温20～22℃，每日光照12 h/黑暗12 h。随机分为三组：假手术组、大脑中动脉栓塞（MACO）组、七氟醚预处理组，每组各30只。各组分别按术后6、24、48 h 3个时间点分为3个亚组，每个亚组各10只。MCAO模型制备参照文献[2]，将脱脂棉塞入小烧杯，在棉花上滴加数滴乙醚，把小烧杯放入麻醉缸内，然后将大鼠放入麻醉缸，迅速盖好盖子，大鼠吸入挥发出的乙醚进入麻醉状态，取颈部正中切口，分离右侧颈总、颈外动脉，并结扎；在颈外动脉上做一切口，插入鱼线栓塞血管，从颈外动脉到达大脑中动脉起始部，固定线栓并缝合切口。栓塞60 min后，再将大鼠麻醉并拔出线栓[4-5]。术后待大鼠完全清醒后放回笼中喂养。假手术组除不插鱼线外，其余操作与MACO组、七氟醚预处理组相同。 　　1.2 试剂与仪器 　　AQP4兔抗大鼠多克隆抗体（Santa Cruze）、七氟醚（Baxte公司）、DNA MaKer（TaKaRa公司）、M-MLV逆转录酶（美国Promega公司产品）、耐热性Taq DNA聚合酶（大连宝生物工程公司）、RT-PCR试剂盒（TaKaRa公司）、琼脂糖（华美生物制品有限公司）。-80℃超低温冰箱（MDF-U32V，SANYO，日本），低温超速离心机（GR-15s，BeCkman，美国），PCR扩增系统（Biometra，德国），凝胶成像分析系统（Box Syngene，美国），紫外分光光度仪（JENWAY-Genova，德国）。 　　1.3 七氟醚预处理 　　在给予大鼠连续4 d，30 min/d的1.2%七氟醚吸入治疗后，进行MCAO手术。在给予七氟醚治疗期间，将大鼠放入密闭呼吸箱内，输入含七氟醚的空气，采用Datex Engstrom监护仪控制输出的七氟醚浓度为1.2%，维持室温24～26℃，待大鼠完全清醒后放回笼中喂养。 　　1.