一株白僵菌菌株分离鉴定及对紫薇梨象成虫致病力初步研究.docVIP

一株白僵菌菌株的分离鉴定及对紫薇梨象成虫致病力的初步研究 　　摘 要：为了得到用于防控紫薇梨象的高毒力菌株，本试验从野外萤火虫僵虫体表分离出一株白僵菌，通过形态学和分子生物学方法鉴定为球孢白僵菌。致病力研究表明，菌株的孢子浓度达到106个孢子/ mL时，对紫薇梨象的致死率为62.5%，具有成为紫薇梨象成虫生物农药的潜力。 　　关键词：白僵菌；紫薇梨象；真菌杀虫剂 　　中图分类号： S476.12文献标识码： A文章编号： 1004-3020（2016）02-0037-03 　　Abstract：In order to screen highly pathogenic strains to Pseudorobitis gibbus Redtenbacher， a strain of Beauveria sp. was isolated from dead firefly. The isolate was identified as B. bassiana by morphological characteristics and the method of molecular biology. P. gibbus was sprayed with a suspension of fungal spores with 1× 106 mL， and the corrected mortality of adults was 62.5% after 15 d. It indicated that the strain of B. bassiana can be applied to biological control of P. gibbus in fields. 　　Key words：Beauveria bassiana； Pseudorobitis gibbus； fungal pesticides 　　紫薇梨象Pseudorobitis gibbus是一种危害紫薇Lagerstroemia indica的重要害虫，主要分布于湖北、山东、江苏、陕西等地[]。紫薇梨象的成虫和幼虫均对紫薇造成危害。其成虫取食嫩叶、嫩梢、花以及幼嫩种子等，幼虫则钻蛀花萼、幼嫩蒴果、种子[2]。目前，对紫薇梨象有较好防治效果的农药有阿维菌素[3]、吡虫啉、氰戊菊酯、甲维盐[]等。 　　白僵菌是一种对较多农林害虫具有较好防治成效的真菌杀虫剂[4]，但是对紫薇梨象的生物防治研究尚未见报道。本研究从林间采集的萤火虫僵虫上分离纯化出一株白僵菌菌株，并通过形态学和分子生物学方法进行鉴定。本研究用分离出的菌株对紫薇梨象进行了感染试验，以期获得紫薇梨象的高效致病菌株，为其生物防治奠定基础。现将研究结果报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 菌株来源 　　菌株来自蕲春林间采集到的1头萤火虫僵虫。 　　1.2 菌株分离、纯化与鉴定 　　直接在僵虫体表挑取菌丝和孢子粉进行分离。在PDA培养基上培养14 d（26 ℃）后，取分生孢子以0.1 %吐温-80的无菌水配制成浓度为1×10个/mL的孢子悬浮液，然后用接种针分别将孢子悬浮液点植于PDA平板培养基（3 个培养皿），每皿3 点，成正三角形排列，最后置于26 ℃恒温培养箱中培养。第7 d观察记录菌落形态特征。同时挑取少量菌丝和孢子，在显微镜下进行形态学鉴定。 　　分子生物学鉴定采用ITS1-5.8S-ITS2 rDNA 区域的特异性PCR扩增，而后测序比对。引物为ITS1F（5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’）和ITS4（5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’）， PCR体系（25 μL）：10× Taq 酶缓冲液，dNTP 各200 mm，MgCl2 3.7 mm，引物各0.4 mm，Taq 酶2 U，模板DNA 5～ 10 ng。PCR 扩增程序为：94 ℃1 min，1 个循环；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃30 s，30 个循环；最后72 ℃ 7 min。DNA测序由宝生物工程有限公司完成。在GenBank进行检索比对同源序列。 　　1.3 感病力测试 　　采用喷雾法测试。野外分离的白僵菌菌株在PDA培养基上培养14 d（26 ℃）后，取分生孢子以0.1% 吐温-80的无菌水配制成浓度为1× 107个孢子/mL的孢子悬浮液，而后再10倍梯度稀释成 1× 106个孢子/mL、1× 105个孢子/mL的孢子悬浮液。选择羽化期相同的紫薇梨象成虫进行测试，将配置好的白僵菌孢子悬浮液分别对试虫喷雾处理。每个处理组10头，重复4次。以清水做对照。处理后置于27±1℃， 60%～80% RH，L∶D= 14∶10的人工气候箱内饲养，及时补充新鲜无