中国野生蘑菇属90个菌株遗传多样性DNA指纹分析.docVIP

中国野生蘑菇属90个菌株遗传多样性的DNA指纹分析 　　摘 要：对90个中国野生蘑菇属菌株(其中44株经同工酶初步鉴定为双孢蘑菇菌株)的总DNA进行SRAP和ISSR分析，获得了18条SRAP和12条ISSR标记条带并进行聚类分析，构建了亲缘关系树状图。结果显示这些菌株大体上可分为野生双孢蘑菇和野生蘑菇属其它菌株两大类群，其中来自川藏高原的41个野生双孢蘑菇按照采集地的不同聚为4个群，地域性差异比较明显；部分来自新疆、西藏的白色野生双孢蘑菇菌株新疆野生、AgX04和AgX042具有独特带型，与其它双孢蘑菇菌株的遗传相似值仅为10%~13%。 　　关键词：中国野生蘑菇菌株；SRAP；ISSR；聚类分析 　　 　　我国野生蘑菇属资源分布广［1］，从辽宁、内蒙古到云南、四川、西藏、新疆都有分布，也是世界双孢蘑菇的重要分布区。但长期以来我国未对野生双孢蘑菇种质资源进行系统的收集、鉴定与研究，也缺乏对它们进行系统的评价，限制了这些宝贵资源的利用［2~4］。近年来，福建省农业科学院食用菌研究所与四川省农业科学院土壤肥料所合作，对中国野生蘑菇属资源特别是双孢蘑菇种质资源进行了系统的收集与鉴定，建立了中国野生双孢蘑菇种质库，研究和评价它们的遗传特性；这将为今后品种改良提供有效的本土亲本材料，对于维护中国作为双孢蘑菇科研、生产与出口大国的地位，维护中国乃至世界食用菌生物多样性和资源的持续利用以及食用菌学科的发展都具有十分重要的意义。 　　本文对90个收集自全国各地的野生蘑菇属菌株进行了序列相关扩增多态性（Sequence-Related Amplified Polymorphism，SRAP）和简单序列重复区间 (Inter-Simple Sequence Repeat，ISSR)的DNA指纹分析，以期获得它们的亲缘关系，并为野生双孢蘑菇菌株的鉴定提供DNA水平的依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1材料 　　1.1.1菌株 　　90个野生蘑菇属菌株(表1)采集自西藏、新疆、四川、甘肃等尚未栽培双孢蘑菇且生态环境保持良好的地区，由福建省蘑菇菌种研究推广站保藏并提供。经子实体表型、生长环境等鉴别均为蘑菇属的菌株，其中有44株经同工酶初步鉴定为中国野生双孢蘑菇菌株，在表1中编号为1～44。 　　1.1.2试剂 　　购自上海生工生物工程技术服务有限公司。 　　1.1.3引物 　　本研究所用的SRAP 6对引物(me1-em2, me1-em5, me2-em3, me2-em4, me5-em9, me5-em10)及ISSR引物(808,809)由陈美元等在206个双孢蘑菇栽培菌株的DNA指纹分析中筛选获得［5］，其序列同参考文献［6，7］。 　　1.2方法 　　菌丝的培养、总DNA的提取、SRAP及ISSR分析方法均同参考文献［5］，使用NTSYSpc-2.02j软件进行分析和聚类。 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1中国野生蘑菇菌株的SRAP指纹图谱分析 　　对90个中国野生蘑菇属菌株的总DNA进行SRAP分析，从引物对me1-em2、me2-em4、me5-em10的扩增图谱中共找到18条比较明显的标记条带，其中部分为双孢蘑菇栽培菌株中发现的标记条带，其余为新发现的蘑菇属其它菌株的标记条带。部分扩增结果见图1～图3，其中图1均为中国野生双孢蘑菇菌株，图2均为中国野生蘑菇属其它菌株(不包含双孢蘑菇)，图3为两个截图，包含上述两类菌株，主要显示3个白色野生双孢蘑菇菌株AgX04、AgX042和新疆野生(编号分别为42、43、44)的独特SRAP带型。 　　 　　2.2中国野生蘑菇菌株的ISSR指纹图谱分析 　　 　　用引物ISSR808和ISSR809对90个中国野生蘑菇属菌株的总DNA进行ISSR分析，获得12条比较明显的标记条带。部分扩增结果见图4～图6。 　　 　　2.3中国野生蘑菇菌株的聚类分析 　　以上述18条SRAP和12条ISSR标记条带对90个中国野生蘑菇属菌株DNA图谱进行分析和统计,得到90个菌株的亲缘关系树状图(图7)。结果显示90个菌株大体上可分为野生双孢蘑菇和野生蘑菇属其它菌株两大类群，这证实了同工酶的鉴定结果。其中，41个来自川藏高原的褐色或浅褐色野生双孢蘑菇按照采集地的不同聚为4个群，包括西藏拉萨1个群、西藏那曲2个群、四川红原1个群，地域性的差异比较明显。由于均为野生双孢蘑菇菌株，各个群的遗传相似值较高，均在62%以上。除了西藏拉萨类群有2个菌株Ag78317和Ag781313的带型与群内其它菌株稍有不同外，其余各群内菌株的带型均较为一致。部分来自新疆、西藏的白色野生双孢蘑菇菌株，即新疆野生、AgX04和AgX042具有独特带型，与上述