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低温胁迫对甜瓜幼苗叶片保护酶活性的影响 　　摘要：本研究选择新疆吐鲁番地区栽植面积比较大的西州密25号为试材，通过-5℃、0℃和常温三个处理，分别于处理后24小时、48小时、72小时、96小时、120小时测定其叶片SOD和POD酶的活性，研究低温胁迫对甜瓜幼苗叶片保护酶活性的影响。结果表明：-5℃以下的甜瓜叶片随着低温胁迫时间的延长，依然保持较高的酶活性，这可能是SOD和POD保护酶活性的耐寒机制已形成，当处理96小时，酶活性达到最高，这是低温的一种适应性反应，使其能比在0℃和常温下更有效地清除体内的有毒物质，保护植物免受伤害或减少伤害。但到96小时后，酶活性开始呈下降趋势，随着低温时间的延长甜瓜有受冻害的可能，因此在甜瓜栽植，遇到冷害时温度和时间都是要必须考虑的因素。 　　关键词：低温胁迫；甜瓜；幼苗；酶活性 　　项目名称：鄯善县哈密瓜主要病虫害综合防控技术 　　中图分类号： S652 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.04.034 　　甜瓜原产于印度、非洲热带沙漠地区，为葫芦科甜瓜属一年生蔓生作物。甜瓜属于冷敏感作物，近年来，随着甜瓜反季节以及早熟设施栽培技术发展迅速，甜瓜冷害问题也日益突出，成为甜瓜栽培生产的主要障碍之一[1-4]。特别是在我国甜瓜栽植面积比较大的新疆吐鲁番地区常常会在春季出现倒春寒或者夏季温度突降的现象，在很大程度上影响了甜瓜的栽植。在早春时节突遇倒春寒将对3月份的甜瓜定植苗造成严重伤害，后期会严重影响甜瓜品质、产量和经济效益，可见研究甜瓜的抗寒性对甜瓜反季节以及设施栽培的稳定发展，提高甜瓜的生产效益具有重要的现实意义。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　于2014年6～7月选择新疆吐鲁番地区主栽的甜瓜品种西州密25号为试材，采集叶片带回实验室，混匀后随机分组进行三个处理：常温，0℃，-5℃。 　　1.2方法 　　将叶片采摘下来0小时的时候先测定SOD酶和POD酶的活性，然后每隔24小时分别测定叶片SOD酶的活性，连续测定5天，时间分别是24小时，48小时，72小时，96小时，120小时。 　　1.2.1 SOD酶活性的测定 　　酶液提取。在处理时间到后，每次分别准时从每个处理中随机取出数个叶片，用软纸将叶片表面的灰尘拭擦干净，除去主脉后用剪刀将叶片剪碎。随机称取0.5克放置于预冷的研钵中，加入适量的石英沙和2毫升已预冷的磷酸缓冲液（其中含1%的PVP）在冰浴上研磨成匀浆并转移至离心管中，接着再分别加入磷酸缓冲液2次，每次2毫升冲洗残留在研钵中的浆液后也转移到离心管中。每两只离心管平衡后，对称放入离心机中在4℃的条件下，转速10000转/分钟离心20分钟，其上清液即为SOD粗提取液（显色反应见表1）。 　　表1 SOD酶的显色反应 　　各种试剂依次加入以后立即震荡摇匀，快速地用黑色塑料袋将其中一支对照管多层缠绕包严，和另外三支试管同时置于4000lx日光灯下反应10分钟（要求各试管照光条件一致，反应温度控制在25℃～35℃）。 　　SOD活性的测定。反应时间到，立即将试管从光源处取出，用黑布罩盖试管，以终止反应。以遮光的对照管为空白，用721分光光度计在560纳米处测定各反应液的吸光度（OD值），利用测得的数据计算SOD活性的大小。 　　1.2.2 POD酶活性的测定 　　酶液提取。采用愈创木酚法，依次取三种温度下处理的叶片，擦干净，大叶片去叶脉，剪碎。用万分之一天平分别称取不同温度处理下的叶片0.5克，分别放入冰冻的研钵中，研磨前加入2毫升的磷酸缓冲液及少许石英沙，进行冰浴研磨，研磨成匀浆状，再加入2毫升的磷酸缓冲液转移到离心管中，最后加入2毫升磷酸缓冲液冲洗研钵，通过加石英沙进行调平，放入低温下准备离心。提前将离心机制冷打开，将调平后的离心管放入离心机中，以10000转/分钟离心20分钟，提取酶液低温储藏。 　　酶活性测定。用三个试管分别取2.9毫升0.05摩尔/升pH 7.8的磷酸缓冲液，1.0毫升0.05摩尔/升的愈创木酚溶液，0.2毫升酶液，1.0毫升2%双氧水，以煮过失活的酶液为对照，反应体系加入酶液后放入34℃的水浴锅水浴3分钟，水浴后迅速加入2毫升 20%三氯乙酸（终止反应液），用721分光光度计470纳米波长下测吸光度，利用测得的数据计算POD活性的大小[5]。 　　2结果与分析 　　2.1 不同低温处理甜瓜叶片SOD酶活性的变化 　　由图1可以看出：在-5℃的条件下，SOD酶的活性在处理24小时后，开始上升，48小时时依然处于上升的状态，在处理72小时后，SOD酶活性达到最大。而后在96小时时开始剧烈的下降，在120小时后其活性已经非常低。在常温的处理条件下：SOD酶的活性变化比较平缓。