哇巴因调控AktmTOR信号通路诱导U87―MG细胞死亡机制研究.docVIP

哇巴因调控AktmTOR信号通路诱导U87―MG细胞死亡机制研究 　　[摘要] 目的 探讨哇巴因（ouabain）对人胶质瘤U87-MG细胞死亡的影响及具体机制。 方法 将培养的U87-MG细胞随机分为正常对照（Control）组和ouabain组，分别加入常规培养基和不同浓度ouabain（0.05、0.5、2.5、25 μmol/L）干预24 h，光学显微镜观察ouabain干预后24 h细胞的形态改变，MTT实验检测细胞活力，免疫印迹法（Western blot）检测Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达变化。 结果 与Control组比较，ouabain显著降低U87-MG细胞活力（均P 0.01），且呈现浓度依赖性；高浓度ouabain（2.5、25 μmol/L）与Control组相比能够降低U87-MG细胞中p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达（均P 0.01）。 结论 高浓度ouabain可能通过抑制胞内Akt/mTOR信号通路，降低肿瘤细胞活力并最终引起细胞死亡。 　　[关键词] 哇巴因；胶质瘤；人胶质瘤U87-MG细胞；Akt/mTOR信号通路 　　[中图分类号] R730.264 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）01（c）-0004-04 　　[Abstract] Objective To explore the effect of ouabain on the human glioma U87-MG cells death and the underlying mechanism. Methods U87-MG cells were randomly divided into control group and ouabain group， which were treated with conventional medium and different concentrations of ouabain （0.05， 0.5， 2.5 and 25 μmol/L） for 24 h， respectively. The morphologic changes induced by ouabain treatment were observed with the light microscope. Cell viability was assessed with MTT assay and Western blot was used to detect the protein expression of Akt， p-Akt， mTOR and p-mTOR. Results Compared to control group， the viability of U87-MG cells treated with ouabain was significantly reduced （all P 0.01） in a dose-dependent manner. Besides， Western blot indicated that higher concentrations of ouabain （2.5 and 25 μmol/L） downregulated the expression of p-Akt， mTOR and p-mTOR when compared to control group （all P 0.01）. Conclusion Higher concentrations of ouabain depressed U87-MG cells viability and ultimately induced cell death via suppression of Akt/mTOR signaling pathway. 　　[Key words] Ouabain； Glioma； Human glioma U87-MG cells； Akt/mTOR signaling pathway 　　胶质瘤（glioma）是恶性程度最高的常见原发性脑肿瘤之一，约占中枢神经系统恶性肿瘤的80%[1]，尽管目前已有多种治疗方案，但胶质瘤患者的中位生存期仅为14个月，治疗失败的主要原因是逐渐增强的化、放疗抵抗[2]，因此亟待发现新的治疗策略以提高胶质瘤患者的治疗效果。 　　哇巴因（ouabain）等强心苷类药物对心肌收缩力的积极作用源于其对Na+/K+-ATP酶的高度特异性抑制，在临床上被用于治疗心力衰竭和其他心脏疾病[3]。最新研究表明，ouabain等强心苷类药物能够通过调节胞内多种信号通路抑制肿瘤细胞的增殖，阻断肿瘤的生