大脑中动脉闭塞大鼠神经功能可塑性物质 基础及电针作用研究.docVIP

大脑中动脉闭塞大鼠神经功能可塑性物质 基础及电针作用研究 　　摘要：目的探讨高血压大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）及电针对不同时间点神经功能影响及可能机制。方法采用易卒中型肾性高血压大鼠(RHRSP)，电凝法制备MCAO模型。随机分为MCAO假手术组、模型组、电针组。MCAO后各组分别于1 d、7 d、14 d、28 d进行神经前体细胞（NPCs） 标记、神经功能缺损评分及电针治疗，在相应时间点处死取脑行病理学处理及免疫组化检查，并观察各组各时间点病灶周围5溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）、神经上皮干细胞蛋白（Nestin）、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）及生长相关蛋白43（GAP43）的阳性细胞数。结果电针组7 d、14 d神经功能评分均高于模型组（P＜0.05），两组均于28 d恢复正常。急性脑梗死灶周增殖细胞数目明显增加，且梗死灶边缘Nestin、GAP43及GFAP细胞在7 d为高峰期。各时间点电针组BrdU、Nestin及GAP43细胞数明显增加（P＜0.05），1周末达到高峰。MCAO后各时间点病灶周围GFAP细胞数均增加(P0.05)，7d时电针组明显低于模型组（Ｐ＜0.05）,仍在1周时细胞数最多。结论急性脑梗死大鼠神经功能障碍在4周可恢复，电针治疗1~2周有促进作用。脑梗死及电针治疗后神经前体细胞、神经干细胞及生长相关蛋白以及星形胶质细胞发生相应变化，构成神经功能可塑性的物质基础，可能是各种治疗措施发挥作用的前提。 　　关键词: 脑梗死；电针；5溴脱氧核苷尿嘧啶；神经上皮干细胞蛋白；胶原纤维酸性蛋白；生长相关蛋白43 　　 中图分类号：R743R255.2文献标识码：Adoi:10.3969/j.issn2014.06.048文章编号2014 　　 　　脑梗死是威胁人类健康常见病、多发病，在我国，其致残率高达80%［1］。所以采取及时有效的治疗对于最大程度地恢复患者的机体功能就显得尤为重要。脑梗死后神经前体细胞(NPCs)可增殖、移行至缺血灶周围，补充、修复神经元的缺失和功能损伤［2］。研究显示，电针可以通过刺激神经传导加强对中枢的兴奋，增加胶质细胞和神经细胞的代谢活性，大量合成与神经细胞功能、细胞间联系、突触新生或重建相关的蛋白质，有利于神经元间联结网发生功能性重组，神经症状得以改善［3］。本研究观察高血压大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）及电针治疗后不同时间点神经功能的变化，梗死灶边缘5溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）、神经上皮干细胞蛋白（Nestin）、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）及生长相关蛋白43（GAP43）免疫组化阳性细胞数的变化，探讨实验性脑梗死及电针治疗后神经功能可塑性的物质基础，以指导临床治疗。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物选用3月～4月龄，体重75 g～130ｇ雄性SD大鼠60只（山西省医用实验动物中心提供），饲料喂养，饮用自来水，室温控制在20 ℃左右。 　　1.2试剂及仪器BrdU、小鼠抗大鼠BrdU单克隆抗体、小鼠抗大鼠Nestin抗体、兔抗大鼠GAP43抗体、兔抗大鼠GFAP抗体、兔抗山羊IgG抗体、鼠抗小鼠IgG抗体、DAB显色剂、SABC试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司；Ｇ6805Ⅱ电针仪；上海产GDＳ型电凝器；SDPⅠ型大鼠心率血压计（中日友好医院研制）。 　　1.3模型制备和动物分组 　　1.3.1高血压及MCAO模型制备应用双肾双夹法［4］复制易卒中型肾性高血压大鼠（strokeprone renovascular hypertensive rats，RHRSP）模型。经尾动脉测血压：肾动脉狭窄前测量１次，狭窄后每周１次。造模后8周无脑卒中症状，体重400 g～500 g的RHRSP大鼠54只，参照 Wahl等［5］的方法电凝大脑中动脉主干,制成MCAO模型。 　　1.3.2动物分组采取随机分为3组。每组分别于MCAO后1 d、7 d、14 d和28 d分为4个小组。假手术组：RHRSP 非MCAO（只作相同的开颅术，但不凝闭大脑中动脉）共14只；模型组：MCAO模型成功的RHRSP每个时间点5只，共20只；电针组：另选MCAO模型成功的RHRSP每个时间点5只行电针治疗，共20只。 　　1.4观察指标及方法 　　1.4.1NPCs标记MCAO 后24 h各组腹腔注射细胞增殖特异性标记物BrdU(50 mg/kg)以标记增殖状态的NPCs。BrdU为粉剂，注射前以10 mg/mL浓度溶于生理盐水。在注射日间隔8 h注射3次。各小组MCAO后注射时间为处死的前1 d。最后一次注射后12 h处死取脑。 　　1.4.2神经功能缺损评分按照Garcia等［5］的18分综合评分法。分别于1 d、7