TRBP2基因过表达对人肺腺癌细胞A549体外增殖、侵袭及迁移的影响及机制研究-外科学(胸心外科)专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语对照 英文缩写 英文全称 中文名称 TRBP2 TAR RNA Binding Protein2 双链 RNA 结合蛋白 2 NSCLC Non-small cell lung cancer 非小细胞肺癌 GFP Green Fluorescent Protein 绿色荧光蛋白 PM Puromycin 嘌呤霉素 miRNA Micro RNA 微小 RNA siRNA Small interfering RNA 小干扰 RNA PKR double-strandedRNA-actibated protein kinase FQ-PCR Fluorescent quantitative polymer- ase chain reaction 双链 RNA 依赖的蛋白 激酶 荧光定 量聚合 酶链反 应 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲溶液 EDTA Ethylene diaminete tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 MTT Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide 噻唑蓝 Min Minute 分钟 ml milliliter 毫升 MOI multiplicity of infection 感染复数 h Hour 小时 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 A Absorbance 吸光度 d Day 天 S Second 秒 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 SDS Sodiumdodecylsulfatepolyacry- lamidegel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 TBS Tris-Buffered Saline Tris 缓冲液 1 PVDF Polyvinylidene fluoride 聚偏氟乙烯 TEMED tetra methyl ethylene diamine 四甲基乙二胺 Rpm μg Revolutions per minute microgramme 每分钟转数 微克 μl microliter 微升 2 TRBP2 基因过表达对人肺腺癌细胞 A549 体外增殖、 侵袭及迁移的影响及机制研究 摘 要 目的 通过构建稳定过表达双链 RNA 结合蛋白 2（TRBP2）基因的细胞 株，探讨 TRBP2 对人肺腺癌细胞 A549 体外增殖、侵袭、迁移能力的 影响及可能机制。 方法 1.构建 TRBP2 慢病毒过表达载体, 以不同感染复数(MOI)感染 A549 细胞, 根据绿色荧光强度选择最适 MOI 值。筛选并获得稳定表达 绿色荧光蛋白的细胞株。 .实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测 TRBP2、MMP-2 及 PKR mRNA 表达 .免疫蛋白印记（Western blot）法检测 TRBP2、MMP-2、p-PKR 及 PKR 蛋白的表达。 4.采用 MTT 法、平板克隆实验检测各组细胞增殖能力。 5.采用 transwell 小室，粘附实验检测各组细胞迁移、侵袭及同、 异种细胞间粘附能力。 3 结果 成功构建了 TRBP2 基因过表达的 A549 细胞系。过表达 TRBP2 慢病毒感染组细胞体外侵袭、迁移能力明显增强（P0.05），同种细胞 间黏附力减弱(P0.05)而异种细胞间粘附能力明显增强(P0.05)；增殖 和克隆形成能力增强（P0.05）；MMP-2、TRBP2 蛋白及 mRNA 表达 量升高（P0.05），PKR 蛋白及 mRNA 表达量无差异（P0.05）、p-PKR 蛋白表达量降低（P0.05）。 结论 该研究表明, 过表达 TRBP2 基因可能通过促进 MMP2 的表达同时抑制 PKR 磷酸化, 而促进肺腺癌 A549 细胞增殖、迁移及侵袭。 关键词 TRBP2，肺腺癌，增殖，侵袭，迁移 4 EFFECT OF TRBP2 OVEREXPRESSION ON PROLIFERATION, MIGRATION AND INVASION OF HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A549 IN VITRO AND ITS MECHANISM ABSTRACT Objective To investigate the effect of TRBP2 gene overexpression on the proliferation, migration and invasion of lung adenocarcinoma A549 c