Th17细胞在特应性皮炎发病中作用机制研究-皮肤病与性病学专业论文.docxVIP

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文名称 AD Atopic dermatitis 特应性皮炎 Th17 T Helper cell 17 辅助性 Th17 细胞 Th1 T Helper cell 1 辅助性 Th1 细胞 Th2 T Helper cell 2 辅助性 Th2 细胞 PMA Phorbol-12-myristate-13-acetate 佛波酯 FK506 Tacrolimus 他克莫司 SEB Staphylococcus enterotoxin B 金黄色葡萄球菌肠毒素 B cDNA Complementary deoxynucleic acid 互补脱氧核糖核酸 IL-17 Interleukin-17 白介素-17 IFN-γ Interferon-gamma γ-干扰素 IL-4 Interleukin-4 白介素-4 ROR γt Retinoid related orphan receptor gamma PBMC Peripheral blood mononuclear cells 孤核受体 外周血单个核细胞 I Ionomycin 离子霉素 ELISA Enzyme linked immunosorbent assay RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 酶联免疫吸附试验 逆转录多聚酶链反应 1 Th17 细胞在特应性皮炎发病中作用机制研究 摘 要 背景 特应性皮炎（atopic dermatitis, AD）作为儿童最常见的三大过敏性 疾病之一，是一种慢性、瘙痒性、复发性、炎症性皮肤病。AD 发病机 制复杂，与遗传易感基因、环境因素、免疫因素和皮肤屏障功能改变 相关。长期以来，普遍观点认为 Th1/Th2 功能失衡是 AD 发病的基础， 急性期表现为 Th2 细胞占优势，慢性期则 Th1 细胞占优势。然而 Th1/Th2 失衡理论并不能很好的解释 AD 发病，随着对机体抗微生物免疫机制 的深入研究，新发现的 Th 细胞家族成员 Th17 细胞成为国内外研究的 焦点。很多研究表明 Th17 细胞在自身免疫性炎症性疾病发生发展过程 中起着关键的作用，2003 年 Toda 等人首次报道 AD 患者急性皮损中高 表达 IL-17 后，相继有研究报道发现 AD 患者皮损及外周血中 Th17 细 胞及细胞因子 IL-17 水平明显高于正常人，提示 Th17 细胞在 AD 炎症 发生中有着重要作用，但具体机制尚不清楚。FK506（他克莫司）作为 一种 T 细胞抑制剂，已广泛用于 AD 治疗，可明显缓解 AD 症状，但 其是否通过 Th17 细胞途径实现对 AD 的治疗尚不明确。SEB（金黄色 葡萄球菌肠毒素 B）作为金黄色葡萄球菌分泌的一种超抗原，诱发或 加重 AD 的机制是否与 Th 细胞亚群改变有关也不清楚。 2 目的 本研究通过检测急性期中~重度 AD 患儿外周血 Th 细胞亚群比例， FK506 和 SEB 对 Th17 细胞特异性核转录因子 ROR γt 的作用及对 PBMC(外周血单个核淋巴细胞)分泌细胞因子 IFN-γ、IL-4、IL-17 的影 响。以探讨 Th17 细胞在 AD 发病中的作用，以及 FK506 和 SEB 对其 影响。 方法 1. 符合 Hanifin-Rajka 诊断标准的急性期中~重度 AD 患儿 86 例（男 50，女 36），SCORAD 评分 33~80，平均 56.12±11.85， 年龄 0.25~14.75 岁，平均 5.39±4.04 岁。健康对照组儿童 81 例（男 48 女 33），年龄 2.92~14.08 岁，平均 5.65±2.02 岁。 2. 本研究用 PMA（佛波酯）+Ionomycin（离子霉素）或 SEB 对 AD 患儿或健康对照 PBMC 进行处理，采用流式细胞术 检测 Th 细胞亚群比例；ELISA 法检测 FK506 和 SEB 对 PBMC 分泌细胞因子 IFN-γ, IL-4，IL-17 水平的影响，同时 实时荧光定量 RT-PCR 法检测 FK506 和 SEB 对 Th17 细胞 特异性核转录因子 ROR γt 改变的影响。 结果 PBMC 中各 Th 细胞亚群比例： 1）PMA+Ionomycin 刺激 PBMC 后，AD 患儿组外周血 Th17、Th2 细胞比例较健康 3 对照组显著升高，Th1 细胞比例较健康对照组显著降低。 AD 患儿组与健康对照组比较， Th17 细胞比例升高 （1.30±0.62 vs 0.63±0.27，p0.001）