(E)-3-(3,5-二羟基-4-异丙基苯基)丙烯酸(NI221)治疗炎症性皮肤病的抗炎活性及初步机制研究药物化学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 重庆大学硕 重庆大学硕士学位论文 I I PAGE PAGE VI 摘 要 炎症性皮肤病是天然免疫系统的异常应答，各种炎症性细胞因子及其靶细胞 （角质形成细胞）介导的炎症性疾病。目前，临床上用于治疗炎症性皮肤病的药 物主要有：糖皮质激素类、大环内酯类以及部分非甾体抗炎药等。然而，长期外 用这些药物会导致皮肤萎缩、毛细血管扩张，青光眼，还可能增加淋巴瘤和皮肤 癌的风险。近年来，炎症性皮肤病患病率呈逐年增高的趋势且致病机理复杂、病 因不清，寻找新的非激素类且毒副作用小的化合物用于治疗炎症性皮肤病仍是药 学研究者关注的焦点。大量研究表明，自然界众多的植物和微生物体内含有丰富 的天然酚类化合物，因其具有广谱的生理活性，如：抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗 病毒和免疫调节作用而越来越受到关注。本论文基于咖啡酸(Caffeic acid，CA)和白 藜芦醇(Resveratrol)衍生物的结构和生理活性，以及 5-（2-苯基乙烯基）-2-异丙基 -1, 3-苯二酚前期的一系列研究为基础，合成筛选出了两个具有潜在抗炎作用的化 合物（E）-3-（3, 5-二羟基-4-异丙基苯基）丙烯酸（NI221）和（E）-苯乙基-3-（3, 5-二羟基-4-异丙基苯基）丙烯酸酯（NI222），并对它们的结构及纯度进行了分析 鉴定。通过二甲苯、佛波酯（12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate，TPA）和花生 四烯酸（Arachidonic acid，AA）诱导的小鼠耳组织炎症动物模型，客观地评价了 NI221 和 NI222 的抗炎活性。此外，通过 TPA 诱导的小鼠耳组织炎症动物模型和 体外活性实验，对 NI221 的抗炎机理进行了研究。 1）通过优化各步反应条件对化合物 NI221 和 NI222 的合成路线进行探讨，利 用波谱分析技术对产物 NI221 和 NI222 的结构进行鉴定，并通过熔点测定分析化 合物的纯度。结果表明，该方法合成的化合物 NI221 和 NI222 产率和纯度均较高， 可以直接用于后续药效学实验。 2）采用二甲苯、TPA 和 AA 诱导的小鼠耳肿胀模型，评价了 NI221 和 NI222 的抗炎作用。从小鼠耳肿胀厚度和相关组织形态学分析结果表明：NI221 对各个模 型的炎症都有抑制作用，且存在明显的剂量依赖关系；在单次 TPA 模型中 NI221 （1.6mg/ear 抑制率为 65.6%，0.8mg/ear 抑制率为 41.7%）抑制水肿的能力比 CA （1.6mg/ear 抑制率为 14.4%，0.8mg/ear 抑制率为 9.5%）强；而 NI222 仅对二甲苯 诱导的炎症有轻微地抑制。 3）NI221 抗炎机制的研究。本论文以 TPA 诱导的小鼠耳肿胀模型为研究对象， 通过测定小鼠耳组织匀浆中髓过氧化物酶（MPO）的活性，评价中性粒细胞的聚 集情况；采用酶联免疫吸附法（ELISA）和实时聚合酶链式反应（RT-PCR）分析 炎症细胞因子 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 的分泌及其转录水平。实验结果表明，NI221 能有效地降低 MPO 的活性，抑制炎症细胞因子 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 的分泌以及 下调它们的 mRNA 水平。推测 NI221 是通过抑制中性粒细胞的聚集和炎症细胞因 子的分泌发挥抗炎作用。 4）研究 NI221 对 5-酯氧化酶（5-LOX）活性的抑制。本研究结合抗炎部分不 同致炎物质诱导小鼠耳肿胀模型的机理和 NI221 对各个模型炎症的抑制情况，推 测 NI221 能有效地抑制 5-LOX 的活性。实验通过酶免疫分析试剂盒（Enzyme Immunoassay Kit，EIA）考察不同浓度的 NI221 对健康人血中 LTB4 的抑制情况。 结果发现 NI221 能显著降低人血中 LTB4 的含量，说明 NI221 为 5-LOX 抑制剂。 关键词：炎症性皮肤病，多酚类化合物，小鼠耳肿胀模型，佛波酯，炎症细胞因 子 英文摘要 英文摘要 重庆大学硕 重庆大学硕士学位论文 III III PAGE PAGE IV ABSTRACT Inflammatory skin disorders are caused by the abnormal response of the natural immune system, and are mediated by a variety of inflammatory cytokines and their target cells (keratinocytes). At present, glucocorticoids, macrolide and some non-steroidal a