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TLR4与足细胞凋亡-肾内科专业论文
独创性声明
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日期: 年 月 日
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保密□ ,在 年解密后适用本授权书。
本论文属于
不保密□。
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学位论文作者签名: 指导教师签名:
日期: 年 月 日 日期: 年 月 日
华
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
目 录
摘 要1
ABSTRACT 2
1.前 言 3
2.资料与方法 4
3.结 果 8
4.讨 论 9
附 图12
参考文献17
综 述19
致 谢26
附 录27
PAGE 10
PAGE 10
摘 要
目的:观察正常小鼠足细胞上 TLR 的表达情况及 TLR4 在其配体 LPS 介导的足细胞 损伤中所起的作用及其可能的信号通路。
方法:用 RT-PCR 检测正常培养的小鼠足细胞表面 TLR mRNA 的表达情况。根据小 鼠足细胞与 LPS 共同孵育时间把足细胞分为 4 组:0h 组、3h 组、6h 组和 16h 组;按 刺激所用 LPS 浓度把足细胞分为 3 组:0μg/ml 组、10μg/ml 组和 20μg/ml 组。用流式 细胞术、RT-PCR 和 Western Blot 分别检测各组足细胞的凋亡情况及 TLR4、MyD88、 TRIF 和 caspase8 的 mRNA 与蛋白水平的表达变化。
结果:正常小鼠足细胞上有 TLR1、TLR2、TLR3 和 TLR4 的 mRNA 表达。LPS 刺激 后足细胞有较低水平凋亡现象,以 6 小时凋亡现象最明显且随着浓度增加而增加。不 同浓度 LPS 刺激小鼠足细胞后,MyD88、TRIF 和 caspase8 的核酸及蛋白表达随浓度 增加而增多。
结论:LPS 可通过 TLR4 的两条信号通路激活 caspase8 介导足细胞的凋亡效应。 关键词:TLR4; LPS;足细胞;凋亡
Abstract
Objective: To observe TLRs expressions on the normally murine podocytes and the possible pathways of the podocyte damage mediated by the TLR4 ligands LPS.
Methods: To detect the mRNA expression of TLR on the surface of cultured murine podocytes by RT-PCR. Podocytes are divided into four groups according to the time be incubate with LPS: Control group, 3 hours, 6 hours, 16 hours group. Detect the cell apoptosis of four groups by Flow cytometry. To divided the murine podocytes into three groups with the LPS concentrations: 0μg/ml, 10μg/ml, 20μg/ml. To detect the cell apoptosis of the three groups by Flow cytometry, the mRNA expressions and the protein level of TLR4, MyD88, TRIF and caspase8 by RT-PCR and westron blot.
Results: TLR1, TLR2, TLR3 and TLR4 mRNA expression can be detected on the normal murine podocytes surface. Low levels of apoptosis occurred in murine podocytes cultured with the LPS.
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