TLR4在宫颈癌中的表达及相关功能研究-妇产科学专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 中文摘要 研究背景 宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，约占所有女性肿瘤的 12%，严重影响妇女 身体健康。近年来研究认为宫颈癌是一种炎性疾病，HPV 持续感染是其主要致病因 素,HPV 病毒癌基因与宿主细胞的 DNA 整合，可导致宫颈上皮细胞发生恶性转化。炎症 在肿瘤发生、发展中的作用再次引起了人们的重视，肿瘤的发生、发展与炎症反应有 着紧密的联系。慢性感染可造成机体发生反复的损伤与修复反应以及组织内环境的紊 乱，通过核转录因子 NF-kB 抗凋亡作用、诱导 DNA 氧化损伤以及组织修复反应等多种 复杂机制，调控肿瘤的发生、发展。肿瘤发生和发展又可造成组织损伤及内环境一些 异常变化，进一步激发炎症反应，诱导炎症介质产生、血管新生与组织重建。但是哪 些激发炎症反应的关键因素参与肿瘤发生、发展还不清楚。TLRs 是最特征性病原模式 识别受体，在机体感染防御中发挥重要作用。最近研究表明，TLRs 不仅表达于免疫细 胞，在许都多肿瘤细胞上也有不同程度地表达。TLRs 通过介导慢性炎症反应一方面作 用于宿主细胞，还可以调控肿瘤的微环境，直接或间接影响肿瘤的发生和发展。但是 TLRs 的这些生物学功能目前尚未完全弄清楚。目前有关 TLRs 在宫颈癌发病机制中作 用的研究报道较少，有限的研究认为 TLR5、TLR9 随着宫颈病变程度的增加，表达逐 渐增强。 TLR4 作为重要的跨膜模式识别受体,不仅可以识别外源性配体，还可以识别机体 产生的内源性配体。TLR4 可以通过识别这些外源性和内源性配体调节炎症反应和构 筑肿瘤的微环境。正常情况下宫颈暴露在自身平衡的菌群环境中，内有大量 TLRs 的 配体存在，特别是 TLR4，而不是 HPV 的病毒环境。但是阴道内的菌群环境是否参与宫 颈癌发生与发展尚不清楚。大多数女性一生中会罹患过 HPV 病毒感染，持续 6-12 月 多能自行缓解。免疫耐受和逃逸可能是 HPV 持续感染的关键。理论上讲，TLRs 通过信 号通路介导机体炎症反应，释放大量的致炎因子如干扰素等，调控病毒感染的防御反 应。目前有关 HPV 和 TLRs 相互关系研究较少。为此，我们首先选择研究 TLR4 是否参 与了宫颈癌的发生、发展，并探讨 TLR4 与 HPV 感染的相关性。 第一部分 TLR4 在正常宫颈、宫颈病变组织以及不同 HPV 亚型宫颈癌细胞株中的表达 目的 从组织、细胞、蛋白质以及 mRNA 转录水平，探讨 TLR4 在正常宫颈组织、 宫颈不典型增生、宫颈癌组织以及不同 HPV 亚型宫颈癌细胞株中表达特点,并 探讨高危型 HPV 对 TLR4 表达的影响。 方法 1、免疫组织化 (IHC)对 12 例因子宫良性病变行全子宫切除的正常宫颈组织、 30 例宫颈轻度不典型增生、30 例宫颈中-重度不典型增生以及 49 例宫颈癌患 者病理石蜡标本进行切片观察，了解 TLR4 在上述组织中的表达特点。 2、细胞免疫荧光法对 HPV18（+）Hela、HPV16（+）Siha 以及 HPV(-)C33a 宫颈癌细胞株进行 TLR4 抗体荧光标记，用免疫荧光显微镜、激光显微共聚焦 显微镜观察 TLR4 在不同 HPV 亚型宫颈癌细胞株中表达特点。 3、蛋白质印迹法检测（WB）TLR4 在不同 HPV 亚型宫颈癌细胞株中表达变化。 4、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测 TLR4 在不同 HPV 亚型宫颈癌细胞 株中表达变化。 结果 1、免疫组化结果显示，TLR4 随着宫颈不典型增生病变程度的增高以及宫颈癌 的分期增加，其表达逐渐增强，正常宫颈组织CIN I CIN II 、III ICC，阳性 表达率分别为 8.33%、20.00%、26.67%和 55.10 % ，TLR4 在各级别病变中的表 达有显著性差异(P0.01)。TLR4 在正常宫颈的粘膜层有表达，在正常宫颈间质 无表达。在宫颈癌 I、II、III 和 IV 期癌组织中，TLR4 的表达呈现递增趋势，分 别为 I 期 50.00%、II 期 57.14%、III 和 IV 期为 62.50%，但无统计学差异( P＞0.05)。 TLR4 的表达与患者年龄以及细胞分化程度无明显的相关性。 2、细胞免疫荧光检测结果显示，荧光显微镜和激光共聚焦显微镜发现 TLR4 表 达在 HPV 阳性宫颈癌细胞的细胞膜上， Siha(HPV16+)表达最强，Hela(HPV18+) 次之，胞浆不表达； HPV 阴性宫颈癌细胞株 C33a(HPV-)细胞膜和胞浆内均表达 不明显。 3、蛋白印迹实验(WB)结果显示，TLR4 在 Siha 中表达最强，Hela 次之，C33a 未见明显的表达