TLR9在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的影响-内科学(风湿病学)专业论文.docxVIP

福建医科大学硕士学位论文 福建医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 3 目 录 中文摘要……………………………………………………………………..….………………………4 英文摘要……………………………………………………………….…..……………………………7 前言……………………………………………………………………………………………………….12 材料和方法…………………………………...………………………………………………….12 结果…………………………..…………………………………………………..………………………24 讨论……………………………………………..………………………………………..………………32 结论……………………………………………………………………..……………..…………………34 参考文献………………………………………………………………..……………..………………35 综述……………………………………………………………………….….…….…………………36 致谢……………………………………………………………………….….…….………………..43 TLR9 在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的影响 【目的】 中文摘要 探讨 TLR9 在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的作用。 【方法】 本实验室将降植烷腹腔注射进 ApoE-/-小鼠，诱导建立系统性红斑狼疮伴动脉 粥样硬化小鼠模型；并在此基础上腹腔注射 TLR9 抑制剂 IRS869 进行干预后，检 测血清中的抗 ds-DNA 抗体水平和肾脏组织中的 IgG、补体 C3、TLR9 及 TLR9 通路 分子和 VEGF 表达水平。 ApoE-/- C57BL/6 小鼠和 C57BL/6 小鼠随机分为 6 组：C57BL/6+生理盐水对照 组（A 组），ApoE-/-+生理盐水对照组（B 组），C57BL/6+降植烷组（C 组），ApoE-/-+ 降植烷组（D 组），C57BL/6+降植烷+IRS869 组（E 组），ApoE-/-+降植烷+IRS869 组（F 组）。高脂饮食喂养 12 周，处死动物。取血清进行 ELISA 检测抗 ds-DNA； 取肾脏组织提取蛋白和 RNA 分别进行 Western Blot 和 Real-time PCR 检测 TLR9 及下游信号通路分子和 VEGF 表达情况；取肾脏组织进行石蜡包埋，免疫荧光检测 IgG 和补体 C3，Massion 染色检测肾脏组织纤维化程度。 【结果】 1.免疫效应指标 1.1 血清抗 ds-DNA 抗体水平 （1）降植烷组血清抗 ds-DNA 抗体水平较 C57BL/6 对照组明显升高（P0.05）， ApoE-/-降植烷组相较 ApoE-/-对照组明显升高（P0.05），ApoE-/-降植烷组与 C57BL/6 降植烷组差异没有统计学意义（P0.05）。 （2）降植烷+IRS869 组相较降植烷组明显下降（P0.05），ApoE-/-降植烷+IRS869 组较 ApoE-/-降植烷组明显下降（P0.05）。 1.2 肾脏免疫荧光情况 （1）直接免疫荧光显示降植烷组、ApoE-/-降植烷组 IgG 在肾小球系膜毛细血管 袢成明显连续性分布，对照组偶尔可见散在颗粒状分布，定量分析降植烷组相对 于 C57BL/6 对 照 组 、 ApoE-/- 降 植 烷 组 相 对 于 ApoE-/- 对 照 组 有 统 计 学 意 义 （P0.05）；间接免疫荧光显示降植烷组、ApoE-/-降植烷组补体 C3 在肾小球系膜 毛细血管袢成明显颗粒状分布，对照组偶尔可见散在颗粒状分布，定量分析降植 PAGE PAGE 5 烷组相对于 C57BL/6 对照组、ApoE-/-降植烷组相对于 ApoE-/-对照组有统计学意 义（P0.05）。 （2）注射 TLR9 抑制剂后降植烷+IRS869 组、ApoE-/-降植烷+IRS869 组分别相对 于降植烷组、ApoE-/-降植烷组，在肾小球系膜毛细血管袢上，IgG 和补体 C3 均明 显减少，定量分析差异具有统计学意义（P0.05）。 2.TLR9 信号通路各分子表达 2.1 肾脏 TLR9 及下游信号通路分子蛋白水平表达情况 （1）Western-blot 分析，降植烷组、ApoE-/-降植烷组 TLR9、MyD88、NF-κB 相 对对照组明显升高，差异具有统计学意义（P0.05）；ApoE-/-降植烷组 TLR9、MyD88、 NF-κB 蛋白水平相对于降植烷组相对升高，差异具有统计学意义（P0.05）。 （2）降植烷+IRS869组、ApoE-/-降植烷+IRS869组TLR9、MyD88、NF-κB的蛋白水 平