TLR信号在呼吸道合胞病毒疫苗增强性免疫病理中的作用-免疫学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要 ·············································································· 1 英文摘要 ·············································································· 4 研究论文 TLR 信号在呼吸道合胞病毒疫苗增强性免疫病理中的作用 前言 7 材料与方法 ····································································8 结果 ·············································································18 附图 ·············································································22 讨论 ·············································································29 结论 ·············································································30 参考文献 ·······································································31 综述 Notch 对固有免疫和适应性免疫的调节 32 致谢 ···················································································41 个人简历 ·············································································42 中 中 文 摘 要 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 TLR 信号在呼吸道合胞病毒疫苗增强性 免疫病理中的作用 摘 要 目的：呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿下呼吸道感染的最重要病原 体，接种疫苗是重要的预防措施，福尔马林灭活疫苗(RSV)因其疫苗增强 性免疫病理(VEP)成为呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗成功研制的主要障碍。 已知 TLR 激动剂作为佐剂可以调节疫苗诱导的免疫应答类型。 本研究选用三种 TLR 激动剂（分别为 TLR-9 配体 CpG2216，TLR-2 配体 PamCys3 和 TLR-3 配体 poly（I:C))作为佐剂，同时采用 MyD88-/- 小鼠，观察 TLR 信号增强或抑制后受到 RSV 攻击的小鼠肺组织免疫病理 的变化，进而研究 TLR 信号在呼吸道合胞病毒疫苗增强性免疫病理中的 作用。 方法： 1 培养细胞来源 RSV 病毒，并测其病毒滴度 。 2 制备福尔马林灭活疫苗 FI-RSV 及对照组疫苗 FI-C。 3 分别用 FI-C,FI-RSV,FI-RSV+CpG2216,FI-RSV+ PamCys3,FI-RSV+ poly(I:C)免疫 C57BL/6 野生型小鼠，用 FI-RSV 免疫 MyD88-/-C57BL/6 小 鼠，共免疫三次，正常对照组不免疫。 4 用 ELISA 方法测末次免疫后血清抗体 IgG，观察不同组对体液免疫 的影响。 5 末次免疫 28 天后用 RSV 鼻腔感染小鼠，正常对照组不感染，观察 感染前至感染后 5 天的体重变化。 6 感染第 5 天，处死小鼠，取小鼠肺组织及肺组织匀浆上清，用实时 定量 PCR 检测肺组织中 RSV 病毒 N 基因(RSV-N),考察病毒在小鼠体内的 复制情况；ELISA 测肺匀浆上清中细胞因子 IL-4，IL-6，IL-12，IL-17， TNF-α,IFN-γ 的含量；考察感染后 Th1 和 Th2 应答是否平衡以及肺部炎症 反映情况；肺部组织切片经 HE 染色，观察炎症浸润和组织损伤情况； PAS(periodic acid Schiff)染色，观察气道粘液分泌情况。 结果： 1 成功培养出 RSV，并测定病毒滴度为 107.3 pfu/ml。 2 成功制备福尔马林灭活疫苗 ( FI-RSV)和对照组疫苗(FI-C)。 3 ELISA 检测血清 IgG 结果：与正常对照组、FI-C 对照组比较，各疫苗免 疫组均诱导了产生 IgG 抗体，有显著性差异(P＜0.05)，各组间 IgG